[发明专利]突变型piggyBac转座酶

说明书

披露了将PiggyBac转座酶工程化以增加在细胞中的稳定性。这些工程化piggyBac转座酶可用于稳定地转化细胞、细胞系发育、基因组修饰和改善重组蛋白的滴度以及其他用途。

本申请要求于2018年12月10日提交的美国临时申请号62/777,325和2019年10月24日提交的美国临时申请号62/925,516的权益，通过引用以整体的形式并出于所有目的将其特此本文，如同在本文中充分阐述一样。

技术领域

本发明涉及经工程化以增加在细胞中的稳定性的piggyBac转座酶，以及这些工程化piggyBac转座酶在稳定地转染细胞、细胞系发育、基因组修饰和改善重组蛋白滴度等方面的用途。

序列表

本申请包含计算机可读形式的序列表(文件名：A-2320-WO-PCT_Sequence.txt，创建于11/5/2019，其大小为64KB)，作为本披露内容的一个单独的部分，并且通过引用以其整体并入本文。

背景技术

由于其广泛的应用，生物制剂在世界范围内被用于各种应用中，诸如治疗和诊断。目前，约51％的已批准的生物制剂是使用哺乳动物细胞生产的，而中国仓鼠卵巢(CHO)细胞是主要的细胞工厂(Zhou和Kantardjeff,Mammalian cell cultures for biologicsmanufacturing[用于生物制剂生产的哺乳动物细胞培养物],Springer[施普林格出版社],纽约州海德堡,2014)。结果，生物制药工业正在经历快速的范式转变。现在的上市速度和成本效率比以往任何时候都更加重要。生物药物的高昂研发成本和较长的开发提前期(leadtime)使得必须消除药物研发以及更重要地，制造中的延误和低效。同时，产品线的复杂性和多样性日益增加，生物制药公司现在需要可适应不同需求的多种模式(从衍生自供体细胞的个性化疗法到每年从几克到几百千克量的生物药物的生产)的基础设施。

因此，需要增加来自宿主细胞的重组蛋白产生并改善表达的长期稳定性。实现该目标的一种方法是改善由细胞表达系统表达的蛋白质的滴度。本文所述的发明提供了有助于增加宿主细胞中表达的piggyBac转座酶稳定性的突变。已经发现，与在包含野生型piggyBac转座酶或未用piggyBac转座酶的细胞中表达的重组蛋白的滴度相比，由用此类突变工程化的核酸序列编码的piggyBac转座酶导致包含该工程化piggyBac转座酶的细胞中表达的重组蛋白的滴度得到了改善。

发明内容