[发明专利]使用凋亡抗性细胞系产生多肽的方法

说明书

本文中提供包含人Bax和Bak基因中的每一者中的功能丧失突变的细胞系(例如HEK293细胞系)，以及包含所述细胞系的细胞培养物。所述细胞系和/或细胞培养物可用于例如产生重组多肽(诸如抗体或其抗原结合片段)或病毒载体的方法中。

相关申请案的交叉引用

本申请案主张2018年12月21日申请的美国临时申请案第62/784,051号的优先权权益，该案以引用的方式整体并入本文中。

技术领域

本发明是关于产生重组多肽或病毒载体的方法，以及可用于例如所述方法中的细胞系和细胞培养物。

背景技术

已确定单株抗体(mAb)和其他重组蛋白质为许多疾病适应症(包括免疫学、肿瘤学、神经科学和其他科学)的成功治疗剂(参见例如Reichert(2017)mAbs.9:167-181；Singh等人,(2017)Curr.Clin.Pharmacol.13:85-99)。由于生物技术行业中有超过300种mAb在开发中，故预计截至2020年，mAb市场将扩展至70种mAb产品(Ecker等人,(2015)mAbs.7:9-14)。随着行业扩展和靶标变得更复杂，需要更大力度的抗体发现活动来筛检多个mAb变异体并鉴定具有所需特征的临床候选物。

使用阳离子聚合物聚乙烯亚胺(PEI)对哺乳动物细胞进行瞬时转染已成为快速产生供大分子开发(包括抗体发现筛检研究)用的重组蛋白质的盛行方法(Baldi等人,(2007)Biotechnol.Lett.29:677-684；Hacker等人,(2013)Protein Expr.Purif.92:67-76；Stuible等人,(2018)J.Biotechnol.281:39-47；Longo等人,(2013)Meth.Enzymol.529:227-240；Rajendra等人,(2015)Biotechnol.Prog.31:541-549)。人类胎肾293(HEK293)和中国仓鼠卵巢(CHO)宿主细胞通常用于瞬时转染，这是因为其高度可转染且其转染过程可规模化。

尽管HEK293产物质量与来自CHO细胞的产物质量相比可能有所不同(Ding等人,(2017)Appl.Microbiol.Biotechnol.101:1889-1898)，但与CHO相比，HEK293转染可在一半时间内产生更高效价(Delafosse等人,(2016)J.Biotechnol.227:103-111；Chiou等人,(2014)Scalable transient protein expression.编.Animal cellbiotechnology:Methods and protocols.Totowa,NJ:Humana Press.第35-55页)，且非常顺应于高通量自动化小规模转染(Vink等人,(2014)Methods 65:5-10；Bos等人,(2014)J.Biotechnol.180:10-16；Zhao等人,(2011)J.Struct.Biol.175:209-215；Girard等人,(2001)Biochem.Eng.J.7:117-119；Raymond等人,(2011)Methods 55:44-51；Nettelship等人,(2010)J.Struct.Biol.172:55-65)。尽管有众多报告描述CHO大规模生物反应器培养和转染，但对HEK293细胞的发现却很少，且目前并无在生物反应器中长期培养HEK293种子培养物以支持常规高通量转染从而产生大量蛋白质的报告。

本文中引用的所有参考文献，包括专利申请案、专利公开案和UniProtKB/Swiss-Prot登录号，皆以引用的方式整体并入本文中，如同明确地且单独地指示各单独参考文献是以引用的方式并入。

发明内容