[发明专利]靶向CARD9的反义寡核苷酸

说明书

本发明涉及与CARD9前mRNA内含子和外显子序列互补的反义LNA寡核苷酸(寡核苷酸)，它能够抑制CARD9蛋白的表达。抑制CARD9的表达对一系列医学疾病是有益的，包括炎症性肠病、胰腺炎、IgA肾病、原发性硬化性胆管炎、心血管疾病、癌症和糖尿病。

以电子方式提交的序列表的引用

将在本申请中提交的电子提交的序列清单的内容(名称：P35118-WO 02-0499-WOSequence_Listing_CARD9.txt；大小：178,721字节；创建日期：2019年12月16日)参照其全部内容并入本文。

发明领域

本发明涉及与CARD9前mRNA序列互补的、能够抑制CARD9的表达的反义LNA寡核苷酸(寡聚体)。抑制CARD9的表达对一系列医学疾病是有益的，包括炎症性肠病(诸如克罗恩病和溃疡性结肠炎)、胰腺炎、IgA肾病、原发性硬化性胆管炎、心血管疾病、癌症和糖尿病。

背景技术

CARD9(胱天蛋白酶募集域蛋白9)是通过C型凝集素受体的抗真菌固有免疫信号通路的核心元件。它是CARD家族的一个成员，该家族通过激活NF-κB在固有免疫应答中发挥重要作用。CARD9介导促炎症细胞因子的产生，包括TNFα、IL-6和IL-1β，从而调控Th1和Th17细胞的反应。

CARD9与许多疾病和病症有关。例如，已经将CARD9的表达关联到心血管疾病、自身免疫性疾病、癌症和肥胖(Zhong等Cell Death and Disease(2018)9:52)。

此外，CARD9已被确定为与炎症性肠病(IBD)、强直性脊柱炎、原发性硬化性胆管炎和IgA肾病风险相关联的基因(Cao等，Immunity 2015 Oct 20；43(4):715-726)。

小分子抑制剂已被用于直接靶向CARD9，以确定使用小分子抑制剂来重现IBD中与保护作用相关的CARD9突变的抗炎功能的可行性(Leshchiner等，Proc Natl Acad SciUSA.2017 Oct 24；114(43):11392–11397)。

Yamamoto-Furusho表明，CARD9的表达可以差异性地区分活动期和缓解期的溃疡性结肠炎(UC)。因此，CARD9被提议作为用于UC患者中的治疗靶标(Journal ofInflammation(2018)15:13)。

此外，有研究结果表明CARD9的表达在严重急性胰腺炎(SAP)患者中是上调的。小干扰RNA(siRNA)被用来降低牛黄胆酸钠刺激的SAP大鼠中CARD9的表达水平。与未治疗组相比，接受siRNA治疗的队列显示胰腺损伤、中性粒细胞浸润、骨髓过氧化物酶活性和促炎症细胞因子显著减少。因此，CARD9被认为是用于急性胰腺炎治疗的靶标(Yang等J Cell MolMed.2016；21(6):1085-1093).

此外，CARD9被提议作为治疗中性粒细胞性皮肤病的靶点(Tartey等，The Journalof Immunology September 15,2018,201(6)1639-1644)。

我们分析了大量针对人类CARD9的LNA gapmer，并确定了目标位点、寡核苷酸序列和反义化合物，这些都是对CARD9表达的强力和有效的抑制剂。

发明目的

本发明鉴定了CARD9转录物(CARD9)的用于体外或体内反义抑制的区域，并提供了反义寡核苷酸，包括LNA gapmer寡核苷酸，其靶向CARD9前RNA或成熟mRNA的这些区域。本发明鉴定了抑制人CARD9的寡核苷酸，这些寡核苷酸在治疗一系列医学疾病中是有用的，包括炎症性肠病、胰腺炎、IgA肾病、原发性硬化性胆管炎、心血管疾病、癌症和糖尿病。

发明概述