[发明专利]用于神经变性疾病的基因疗法

权利要求书

1.一种分离的核酸，其包含编码抑制APOE4的表达或活性的抑制性核酸和表达APOE2的转入基因的表达构建物。

2.根据权利要求1所述的分离的核酸，其中所述抑制性核酸由SEQ ID NO：5-8、12-15和17-20中的任一者所示的序列编码。

3.根据权利要求1或2所述的分离的核酸，其中所述抑制性核酸由SEQ ID NO：7、8、14、15、19和20中的任一者所示的序列编码。

4.根据权利要求1至3中的任一项所述的分离的核酸，其中所述表达APOE2的转入基因编码具有SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列的蛋白质。

5.根据权利要求1至4中的任一项所述的分离的核酸，其中所述表达APOE2的转入基因包含密码子优化的核酸序列，任选地其中所述核酸序列示出在SEQ ID NO：4中。

6.根据权利要求1至5中的任一项所述的分离的核酸，其中所述表达构建物两侧带有腺相关病毒(AAV)反向末端重复(ITR)。

7.根据权利要求6所述的分离的核酸，其中所述ITR是AAV2 ITR。

8.根据权利要求1至7中的任一项所述的分离的核酸，其中所述分离的核酸包含SEQ IDNO：11、16和21中的任一者所示的序列。

9.一种分离的核酸，其包含编码APOE2蛋白的表达构建物，其中所述分离的核酸包含SEQ ID NO：4所示的序列。

10.一种分离的核酸，其包含编码抑制APOE4的表达或活性的抑制性核酸的表达构建物。

11.根据权利要求9或10所述的分离的核酸，其中所述表达构建物两侧带有腺相关病毒(AAV)反向末端重复(ITR)，任选地其中所述ITR是AAV2 ITR。

12.根据权利要求1至11中的任一项所述的分离的核酸，其还包含一个或多个启动子，任选地其中所述一个或多个启动子各自独立地是鸡β-肌动蛋白(CBA)启动子、CAG启动子、CD68启动子或JeT启动子。

13.一种载体，其包含根据权利要求1至12中的任一项所述的分离的核酸。

14.根据权利要求13所述的载体，其中所述载体是质粒。

15.根据权利要求13所述的载体，其中所述载体是病毒载体，任选地其中所述病毒载体是重组AAV(rAAV)载体或杆状病毒载体。

16.一种组合物，其包含根据权利要求1至12中的任一项所述的分离的核酸或根据权利要求13至15中的任一项所述的载体。

17.一种宿主细胞，其包含根据权利要求1至12中的任一项所述的分离的核酸或根据权利要求13至15中的任一项所述的载体。

18.一种重组腺相关病毒(rAAV)，其包含：

(i)衣壳蛋白；和

(ii)根据权利要求1至12中的任一项所述的分离的核酸或根据权利要求15所述的载体。

19.根据权利要求18所述的rAAV，其中所述衣壳蛋白能够跨过血脑屏障，任选地其中所述衣壳蛋白是AAV9衣壳蛋白或AAVrh.10衣壳蛋白。

20.根据权利要求18或权利要求19所述的rAAV，其中所述rAAV转导中枢神经系统(CNS)的神经元细胞和非神经元细胞。