[发明专利]用于神经变性疾病的基因疗法

说明书

本公开在某些方面涉及用于治疗神经变性疾病例如阿兹海默氏病的组合物和方法。在某些实施方式中，本公开提供了表达构建物，其包含编码APOE蛋白亚型或其部分的转入基因、靶向APOE基因或其部分的抑制性核酸或上述组分的任何组合。在某些实施方式中，本公开提供了通过向需要的对象给药表达构建物来治疗阿兹海默氏病的方法。

相关申请

本申请要求2018年11月28日提交的题为“用于神经变性疾病的基因疗法”(GENETHERAPIES FOR NEURODEGENERATIVE DISEASE)的美国临时申请系列号62/772,230的提交日期在美国专利法第119条(e)下的权益，所述临时申请的全部内容通过参考并入本文。

背景技术

阿兹海默氏病(AD)是最常见形式的痴呆症，仅在美国就影响超过5百万人。阿兹海默氏病是一种不可逆的渐进性脑部障碍，以遍及整个脑部的异常蛋白沉积物的存在为特征，所述沉积物抑制神经元功能、破坏神经元之间的连接并最终导致细胞死亡。这些沉积物包含β-淀粉样肽的斑块和由磷酸化tau蛋白形成的缠结。患有轻度AD的患者经历失忆，导致流浪、难以理财、重复提问以及性格和行为改变。中度AD患者表现出增加的失忆，导致意识混乱和难以识别朋友和家人、无法学习新事物、幻觉、妄想和偏执狂。患有严重AD的患者无法交流并且完全依赖他人照顾。最终，蛋白斑块和缠结蔓延到整个脑部，导致显著的组织萎缩。

发明内容

大多数阿兹海默氏病(AD)患者具有晚发型AD，其中症状在对象的60多岁中期出现。载脂蛋白E(APOE)基因参与晚发型AD的发生。APOE具有几种亚型，包括针对AD提供保护的APOE2和与发生晚发型AD的风险提高相关的APOE4。带有两个APOE4拷贝的纯合患者(例如APOE4+/+对象)与带有一个APOE4拷贝和一个APOE2或APOE3拷贝的杂合患者相比处于甚至更大的发生晚发型AD的风险之中。

本公开的各种情况涉及用于治疗患有或怀疑患有AD的对象的组合物和方法。本公开部分基于编码靶向AD相关基因(例如APOE，例如APOE4)的抑制性RNA(例如shRNA、miRNA、amiRNA等)的表达构建物。

在某些情况下，本公开基于编码APOE2(或其部分)和任选的来自于AD相关基因的一种或多种另外的基因产物(例如靶向APOE4的抑制性核酸)的表达构建物(例如载体)。不希望受到任何特定理论限制，本文中描述的基因产物的组合当在对象中表达时一起(例如协同)起作用，以减轻AD的一种或多种体征和症状。

因此，在某些情况下，本公开提供了一种分离的核酸，其包含编码APOE2蛋白的表达构建物，其中所述分离的核酸包含SEQ ID NO：4所示的序列。

在某些实施方式中，本公开提供了一种分离的核酸，其包含编码抑制APOE4的表达或活性的抑制性核酸和表达APOE2的转入基因的表达构建物。在某些实施方式中，所述表达构建物两侧带有腺相关病毒(AAV)反向末端重复(ITR)。在某些实施方式中，所述ITR是AAV2ITR。

在某些实施方式中，抑制性核酸与SEQ ID NO：1所示的序列的至少6个毗连核苷酸互补。在某些实施方式中，抑制性核酸是包含SEQ ID NO：5-8、12-15和17-20中的任一者所示的核酸序列(或由所述核酸序列编码)的抑制性RNA。在某些实施方式中，抑制性核酸包含SEQ ID NO：7、8、14、15、19和20中的任一者所示的序列(或由所述序列编码)。

在某些实施方式中，表达APOE2的转入基因编码具有SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列的蛋白质。在某些实施方式中，表达APOE2的转入基因包含密码子优化的核酸序列。在某些实施方式中，编码APOE2的密码子优化的核酸序列示出在SEQ ID NO：4中。

在某些实施方式中，本公开提供了一种分离的核酸，其包含SEQ ID NO：11、16和21中的任一者所示的序列。