[发明专利]抗微生物剂敏感性试验及试剂盒

权利要求书

1.一种快速测定微生物对抗微生物剂敏感性的方法，包括以下步骤：

a)将含有微生物的第一样品与第一生长培养基接触，以形成第一混合物，其中所选第一生长培养基使微生物能够增殖和/或促进微生物细胞周期开始增殖；

b)将含有微生物的第二样品与第二生长培养基接触，以形成第二混合物，其中第二生长培养基与第一生长培养基基本上相同，但进一步包含可能抑制或减缓微生物增殖的第一抗微生物剂；

c)在适合于实现或促进微生物增殖的条件下，将第一混合物和第二混合物孵育30分钟或更短时间；

d)使第一混合物和第二混合物或它们的一部分通过流式细胞仪，以对这两种混合物中微生物的一个或多个生物化学参数和/或生物物理参数进行评估；和

e)孵育后，将第一混合物中微生物的参数与第二混合物中微生物的参数进行比较，以检测第一抗微生物剂是否抑制或减缓微生物的增殖，从而确定微生物对所述抗微生物剂的敏感性。

2.根据权利要求1所述的方法，其中步骤b)进一步包括将一种或多种含有微生物的其他样品与一种或多种其他生长培养基接触，以形成一种或多种其他混合物，其中所述一种或多种其他生长培养基与第一生长培养基相同，但进一步包含一种或多种可能抑制或减缓微生物增殖的其他抗微生物剂，其中所述一种或多种其他抗微生物剂彼此不同，并且与第一抗微生物剂不同。

3.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述微生物的一种或多种生物化学参数和/或生物物理参数选自以下中的一种或多种：细胞大小、细胞数量、细胞膜电活动和/或核酸含量和/或核酸分布。

4.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述微生物的一种或多种生物化学参数和/或生物物理参数通过评估一种或多种荧光染料或其他染料的摄取来测定。

5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述参数是细胞大小、细胞数量和/或细胞膜电活动，并且其中所述培养基进一步包含羰花青染料，或者在步骤d)之前，将羰花青染料加入到混合物或混合物的一部分中。

6.根据权利要求5所述的方法，其中所述羰花青染料包括3,3'-二丙基硫杂二羰花青碘化物(di-S-C3(5))。

7.根据权利要求5或6所述的方法，其中所述羰花青染料在所述混合物中的浓度介于约1μM至约5μM。

8.根据权利要求7所述的方法，其中所述羰花青染料在所述混合物中的浓度介于约3μM。

9.根据前述权利要求5至8中任一项所述的方法，其中所述流式细胞仪依赖于640nm处的激发，在675±15nm处评估参数。

10.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述参数是核酸，并且所述核酸包括DNA。

11.根据权利要求9所述的方法，其中在步骤d)之前，将光辉霉素和/或核酸染料添加到混合物或混合物的一部分中，并且任选地，用流式细胞仪在约572nm处评估DNA分布。

12.根据权利要求11所述的方法，其中所述核酸染料包括SYBR Green或溴化乙锭。

13.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述生长培养基包括超级肉汤。

14.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中步骤c)在约35℃至约40℃范围内的温度下进行。

15.根据权利要求14所述的方法，其中步骤c)在约37℃的温度下进行。

16.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中在多个时间点评估第一混合物和第二混合物的一部分，或者从属权利要求2所述的一种或多种其他混合物的一部分。