[发明专利]抗微生物剂敏感性试验及试剂盒

说明书

本发明涉及一种快速测定微生物对抗微生物剂敏感性的方法，包括以下步骤：a)将含有微生物的第一样品与第一生长培养基接触，以形成第一混合物，其中所选第一生长培养基使微生物能够增殖和/或促进微生物细胞周期开始增殖；b)将含有微生物的第二样品与第二生长培养基接触，以形成第二混合物，其中第二生长培养基与第一生长培养基基本上相同，但进一步包含可能抑制或减缓微生物增殖的第一抗微生物剂；c)在适合于实现或促进微生物增殖的条件下，将第一混合物和第二混合物孵育30分钟或更短时间；d)使第一混合物和第二混合物或它们的一部分通过流式细胞仪，以对两种混合物中微生物的一个或多个生物化学参数和/或生物物理参数进行评估；和e)孵育后，将第一混合物中微生物的参数与第二混合物中的参数进行比较，检测第一抗微生物剂是否抑制或减缓微生物的增殖，从而确定微生物对所述抗微生物剂的敏感性。该方法特别适用于确定哪些抗微生物剂适合治疗微生物感染，例如尿路感染(UTI)。在相应的试剂盒中提供了加富生长培养基，一种或多种抗微生物剂和羰花青染料。

技术领域

本发明涉及用于在微生物感染患者样品中检测抗微生物剂敏感性的快速试验方法。本发明特别适用于在尿路感染(“UTI”)患者尿液中检测抗微生物剂敏感性。

背景技术

众所周知，现存在抗微生物剂耐药性的危机(Andersson and Hughes 2010；Bakeret al.2018；Gelband and Laxminarayan 2015；Laxminarayan et al.2016；Li etal.2016；Macedo et al.2013；Mendelson et al.2017；Roca et al.2015)，导致出现这种危机的部分原因在于用药错误。用药错误有两种形式：(i)在非细菌性感染时使用了可能有效的抗生素；或者(ii)在细菌性感染时使用了错误的(即无效的)抗生素。希望有一种非常快速的方法，甚至在患者离开医生手术室之前就可以知道某种特定的抗生素确实能够杀死目标生物体。虽然基因型(全基因组测序)方法在这方面有一定的前景(Buchan andLedeboer 2014；Didelot et al.2012；Dunne et al.2017；Kirkup et al.2013；etal.2012；Kwong et al.2015；Roach et al.2015；Schmidt et al.2016；Tsai et al.2016；Tuite et al.2014；van Belkum and Dunne 2013)，但真正需要的是在样品本身中评估抗感染活性(Farha and Brown 2010)的表型分析(Kelley 2017；Murray et al.2015；Schmiemann et al.2010)。但是，由于几乎所有抗生素，无论是抑菌性还是杀菌1(Kohanskiet al.2007)，都仅在细胞试图复制时才显示出其功效(Coates et al.2011)，由于存在迟缓期(如下所述)，因此人们可能会认为这是一个无法实现的目标。

尿路感染(“UTI”)是世界性的患者问题(Schmiemann et al.2010)。除了医院获得性感染外(Cek et al.2014)，尿路感染在女性中尤为常见，每2名女性中就有1人在其生命中的某个时间点经历过UTI(Foxman 2010)。大肠杆菌是引起UTI最常见的病原体(2011；Foxman 2010；Mehnert-Kay 2005；Wilson and Gaido 2004)。然而，还发现其他肠杆菌如奇异变形杆菌、克雷伯菌属和铜绿假单胞菌，甚至葡萄球菌和肠球菌等革兰氏阳性球菌也可能引起UTI(Kline and Lewis 2016；Tandogdu and Wagenlehner 2016)。在初级治疗中滥用和过度使用抗生素是产生抗微生物剂耐药性的主要原因(Bryce et al.2016；Ceket al.2014；Tandogdu and Wagenlehner 2016)，因此开具正确的抗生素处方非常重要(Kerremans et al.2008；Kirchhoff et al.2018)。对于无症状UTI，通常完全不用药是一个适当的策略(et al.2017)。