[发明专利]用于低浓度李斯特菌属的检测和计数的方法

权利要求书

1.一种用于检测样本中的鼠李糖发酵李斯特菌属，例如单核细胞增生李斯特菌的方法，所述方法包括或由以下步骤组成：

i)在第一培养基中制备可能含有李斯特菌的样本的悬浮液，所述第一培养基包含鼠李糖、一种或多种抗生素、pH颜色指示剂和LiCl；

ii)在允许李斯特菌生长的条件下孵育所述悬浮液；以及

iii)鉴定阳性样本。

2.根据权利要求1所述的方法，所述方法还包括对鼠李糖发酵李斯特菌属进行计数，所述方法包括步骤ia)将步骤i)中制备的所述悬浮液转移至多孔托盘，以及在步骤iii)之后执行的步骤iv)例如通过使用最可能数方法计算所述样本中的所述李斯特菌的浓度。

3.根据权利要求1或2所述的方法，所述方法还包括确认单核细胞增生李斯特菌的存在的步骤，例如通过利用分子方法，例如通过将步骤iii)中鉴定出的阳性样本铺板在第二生长培养基例如ALOA培养基上，通过聚合酶链式反应或原位杂交、ELISA、VITEC和/或API，所述步骤在权利要求1中的步骤iii)或权利要求2中的步骤iv)之后执行。

4.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中可能含有鼠李糖发酵李斯特菌属的所述样本是在执行步骤i)之前和/或在步骤i)的所述第一培养基中通过例如通过均质化、切片和/或切碎将所述样本分成小块而获得的。

5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述抗生素是萘啶酸、头孢他啶、硫酸多粘菌素B、放线菌酮、两性霉素B中的一者或多者，优选地所述抗生素中的任何抗生素中的两种或更多种抗生素的组合。

6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述pH颜色指示剂是酚红。

7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述LiCl以约5-17g/l，例如约7-13g/l，例如约10g/l的量存在。

8.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述鼠李糖以约5-17g/l，例如约7-13g/l，例如约10g/l的量存在。

9.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述样本是食物样本、环境样本、或来自动物例如人的样本，例如组织样本或粪便样本。

10.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述食物样本是生的或加工的肉、家禽或鱼产品、蔬菜或即食食物产品。

11.根据权利要求1-9中任一项所述的方法，其中所述环境样本是水样本、污垢样本或食物工业环境样本，例如表面拭子样本。

12.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述方法在封闭系统中执行。

13.一种用于生长和/或检测鼠李糖发酵李斯特菌属，例如单核细胞增生李斯特菌的培养基，所述培养基包含：

e)浓度为约5-15g/l，例如约7-13g/l，例如约10g/l的鼠李糖；

f)一种或多种抗生素，例如萘啶酸、头孢他啶、硫酸多粘菌素B、放线菌酮、两性霉素B，优选地这些抗生素中的至少两种抗生素；

g)pH颜色指示剂，例如酚红；以及

h)浓度为约5g/l至约15g/l，例如约7g/l至约13g/l，例如约10g/l的LiCl。

14.一种用于检测和/或计数样本中的鼠李糖发酵李斯特菌属，例如单核细胞增生李斯特菌的试剂盒，所述试剂盒包括：

a)容器，所述容器包含培养基，所述培养基包含或由鼠李糖、一种或多种抗生素、pH颜色指示剂和LiCl组成；

b)容器或多孔托盘，所述容器或多孔托盘用于培养可能含有李斯特菌的样本；以及

c)任选的用于鉴定阳性样本的比色表；以及

d)任选的使用说明。

15.一种计算机实现的计算器，所述计算机实现的计算器用于基于通过根据权利要求1-12中任一项所述的方法对样本中的菌落形成单位的检测和计数来显示对李斯特菌例如单核细胞增生李斯特菌的生长的预测，所述计算器包括：

c)输入设备，例如键盘或麦克风；

b)输出设备，例如显示器、电脑或移动电话屏幕或扬声器；

d)可下载或存储器中的软件，例如智能手机或网页上的应用程序；

其中所述软件接受所述样本中存在的范围为0.04cfu/g至1cfu/g的任意数量的菌落形成单位的输入。