[发明专利]用于低浓度李斯特菌属的检测和计数的方法

说明书

本文件涉及一种用于检测和/或计数样本中的李斯特菌，例如单核细胞增生李斯特菌的方法，所述方法包括在包含鼠李糖、一种或多种抗生素、pH颜色指示剂和LiCl的培养基中培养可能含有李斯特菌的样本。

技术领域

本文件涉及用于检测和/或计数样本中的李斯特菌(Listeria)，例如单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes)的方法和手段，其中所述方法包括在选择性生长培养基中培养可能含有李斯特菌的样本，从而允许更快速和灵敏地检测李斯特菌。

背景技术

单核细胞增生李斯特菌是一种食源性病原体，其每年会导致数以千计的李斯特菌病病例。仅在欧洲，每年就报告了约1500起病例(EFSA 2018)。尽管李斯特菌病的病例比沙门氏菌病和弯曲杆菌病少，但是李斯特菌病的病死率更高。

单核细胞增生李斯特菌是导致疾病李斯特菌病的病原菌物种。它是一种革兰氏阳性兼性厌氧菌，能够在存在或不存在氧的情况下存活。它可以在宿主细胞内生长和繁殖，并且是毒性最强的食源性病原体之一。高危个体中的李斯特菌病感染可能是致命的。

单核细胞增生李斯特菌(L.monocytogenes)是一种无处不在的细菌，这意味着它存在于许多不同的生态位如土壤、水、食物、食物生产环境、动物和人类中。它很容易在食物生产设施中形成贮库，甚至在具有高卫生标准且实施HACCP系统的设施中也是如此。EFSA已报告特定类别的即食食物中的单核细胞增生李斯特菌的流行率为0.5-6％。鱼类和海鲜产品中的流行率最高(EFSA 2018)。

单核细胞增生李斯特菌具有在低至0℃甚至低至-1.5℃的温度下生长的能力，这允许在典型的冷藏温度下增殖，这由此大大增加了其逃避人类食物控制的能力。

最容易变成感染李斯特菌的人，尤其是老年人、免疫系统受损的人和孕妇(胎儿)。即使是少量的细菌，低至100-1000个菌落形成单位(cfu)/克，也可在高危人群中引起疾病，并且感染可能是致命的，并且在孕妇的情况下甚至会导致流产。健康人通常不会受到单核细胞增生李斯特菌的影响，但高剂量可导致通常无害的轻微症状。在过去的几十年期间，挪威每年记录了20-50例李斯特菌病病例。当按居民数衡量时，这与欧洲其他地区的频率差不多。

李斯特菌病的后果非常严重，严重时其可导致死亡并且社会成本非常高。单核细胞增生李斯特菌可感染宿主的脑、脊髓膜和/或血流。

以下事实的组合导致了立法中以及客户，包括挪威鱼的买家对单核细胞增生李斯特菌的强烈关注：李斯特菌病对人类来说是非常严重的疾病；食物中的李斯特菌相对频繁地发生；并且可以通过相对简单的手段将食物中的单核细胞增生李斯特菌保持低于致病数。

李斯特菌可以定性或定量地分析。ISO方法11290-1(定性)和11290-2(定量)是立法中的标准方法。然而，这些方法的检测限分别是1cfu/25克和10cfu/g，这对于可能发生污染的工艺步骤(例如在产品被送到市场之前的鱼类屠宰和切柳期间)的分析不够细致。从事渔业贸易的人已经这样描述了ISO方法的局限性：“如果所述方法用于测量血压，则结果将会是存在低于1000的血压。这种信息没有细致到足以可用。以相同的方式，需要用于测量在介于0.04cfu/g与10cfu/g之间的范围中的李斯特菌浓度的方法。

李斯特菌能够在冷藏期间在食物中生长。当消费者食用食物时达到多高的浓度将取决于产品条件、存储条件、工艺条件和进食的消费者的脆弱性。在一些产品，如打算在沙拉或用作寿司或生鱼片的鱼中冷却使用的热处理肉中，如果初始浓度高于2cfu/g，则在合理可预见的条件下浓度可达到对健康消费者构成食品健康风险的水平，但是对于脆弱消费者，初始浓度需要低于0.2cfu/g。在其他产品中，浓度可以更高，但在大多数情况下，从食品安全视角来看可接受的浓度介于0.2cfu/g与5cfu/g之间。ISO方法不区分这些浓度，因为无法计数低于10cfu/g的水平，除非应用许多平板、过滤样本或通过其他方式获得培养液中更高浓度的样本。