[发明专利]一种凝血因子Ⅷ中间品的冻存方法

说明书

本发明公开了一种凝血因子Ⅷ中间品的冻存方法，属于血液制品领域。所述凝血因子Ⅷ中间品取自凝血因子Ⅷ制剂制备过程中原液制备前或超滤浓缩前或超滤浓缩后的FⅧ浓缩液或FⅧ层析洗脱液以及它们的组合或变形。本发明还公开了上述冻存方法在制备凝血因子Ⅷ制剂、减少凝血因子Ⅷ制品杂质析出、提高凝血因子Ⅷ制品长期稳定性等方面的用途。FⅧ中间品经本发明公开的方法冻存处理，可以确保FⅧ活性维持而比活性提升，同时经后续工艺可制成符合中国药典要求的终产品。本发明公开的凝血因子Ⅷ中间品的冻存方法增加了FⅧ生产工艺的灵活性，利于扩大产能、大规模生产FⅧ制剂。

技术领域

本发明属于血液制品技术领域，具体涉及凝血因子Ⅷ中间品的冻存方法，以及包含凝血因子Ⅷ中间品冻存方法的凝血因子Ⅷ制剂的制备工艺。

背景技术

凝血因子Ⅷ制剂(以下简称FⅧ制剂)是防治甲型血友病人出血的特效血液制剂。甲型血友病患者输注凝血因子Ⅷ制剂可以直接补充其血浆中的FⅧ水平，从而治疗或预防出血并改善症状。甲型血友病是一种伴性遗传疾病，人群中甲型血友病的发病率约1/5000。临床表现以关节、肌肉、内脏和深部组织自发性或轻微外伤后出血难止，常在儿童期起病，反复关节出血导致患儿逐渐出现关节活动障碍而残疾。甲型血友病患者由于凝血机制缺陷，受伤后流血不止，需要输用足量的FⅧ制剂。虽然FⅧ制剂止血效果显著，但是在体内不能持久，再次出血需要再次输注。如果采用为患者定期输注浓缩FⅧ的预防疗法，即使是重度血友病患者，也可以过上和正常人几乎一样的生活。因此，甲型血友病病人的总数虽然不多，但对FⅧ制剂的需求量却很大。

凝血因子替代治疗仍然是目前血友病最有效的急性出血的止血措施，治疗原则是早期、足量、足疗程。替代治疗剂量和疗程应考虑出血部位和出血严重程度。急性出血时要按需治疗：可选基因重组FⅧ制剂或者病毒灭活的血源性FⅧ制剂，无条件者可选用冷沉淀或新鲜冰冻血浆，但有输血传播病毒感染风险，儿童血友病应尽量避免使用。

临床使用FⅧ重组产品遇到的问题是：大剂量反复使用基因重组的高纯FⅧ，抑制物即FⅧ抑制性抗体产生风险更高(SFDA.EMEA警告重组人凝血因子Ⅷ产生抗体的风险.药物警戒快讯，2006,3(3)：187)，而FⅧ抑制性抗体很难自动清除，进而造成非控制性出血、住院率提高以及关节损害等，最终导致发病率和死亡率升高。而相对基因重组的高纯FⅧ，反复使用血源性FⅧ后产生FⅧ抑制性抗体的程度要低，尤其对于儿童甲型血友病患者。因此对于需要长期输注FⅧ的甲型血友病患者来说，血源性FⅧ抑制性抗体安全性更高，同时价格更低，医药负担更轻。因此，存在进一步开发优化血浆来源的人FⅧ产品工艺路线的需求，以满足甲型血友病患者对预防/治疗用药的可及性和临床用药的选择性。

酸沉淀法结合柱层析纯化法是制备血源性FⅧ的经典方法之一，其原理是：FⅧ具有低温不溶解性，血浆中约50％的FⅧ随冷沉淀而沉淀，以血浆冷沉淀为原料溶解液经铝凝胶吸附维生素K依赖性凝血因子，使凝血链打断，以使制造过程FⅧ不被激活而失去活性，根据纤维蛋白原(Fg)蛋白分子氨基酸残基特性，在偏酸性pH条件沉淀去除Fg，同时大部分FⅧ保留在上清液中。由于受前端纯化工艺步骤处理能力的限制，FⅧ制剂大规模生产存在困难。各血液制品企业面临的现实情况是，相比于静注人免疫球蛋白、人血白蛋白等产品，血液制品企业每批次血浆投浆量对应能获得的FⅧ成品产量有限，相比分装冻干等工艺步骤的处理能力，前端纯化工艺步骤比如原液除菌过滤前的工艺步骤的处理能力小很多。因此，FⅧ制剂的生产规模一定程度上受制于原料血浆冷沉淀制备规模和原液除菌过滤前中间品的制备规模，但是血液制品企业又无法简单地通过加大投浆量来解决上述问题。原因在于，FⅧ的生产线是基于人免疫球蛋白、人血白蛋白等重要血液制品的生产线开发的，因此血液制品企业每批次投浆量对应能获得的FⅧ成品产量有限；对于血液制品企业来说，生产线建成后，每批次的投浆量也即固定，未经药品监督管理部门的批准，不能随意变更生产线。通常为了扩大产能，施以平行的方式以在相同的时间内以期获得更大产能，但是这对资金、组织和基础设施都提出了更高更大的要求。综上所述，不管血液制品企业生产规模是大是小，FⅧ制剂生产工艺前后端生产规模不匹配的矛盾总是存在。