[发明专利]一种辅助生殖技术用鼠胚试验囊胚细胞染色和计数试剂盒

说明书

本发明公开了一种辅助生殖技术用鼠胚试验囊胚细胞染色和计数试剂盒,由胚胎漂洗液、胚胎固定液、透膜液、封闭液、阴性对照、初级抗体、二级抗体、细胞核染色液及制片液9种试剂组成。属于细胞学、生物技术领域。通过荧光染色检测小鼠囊胚细胞总数和内细胞团细胞数，以评估辅助生殖技术（Assisted Reproductive Technology,ART）用耗材、试剂、仪器设备以及环境的质量。为辅助生殖技术的质量控制提供了一种敏感和有效的检测手段，也为辅助生殖技术及生殖研究提供了参考标准。

技术领域

本发明涉及细胞学、生物技术领域，具体地说涉及一种辅助生殖技术用鼠胚试验囊胚细胞染色和计数试剂盒。

背景技术

辅助生殖技术的基本概念是通过配子的体外受精及胚胎体外培养，获得优质胚胎移植于母体子宫，从而怀孕的全部过程。从获取配子到胚胎移植的全部过程发生在体外，因此需要模拟体内的外部环境及营养条件。这些外部因素包括了处理配子及胚胎的各种耗材、培养液、仪器设备甚至空气环境等，并且必需符合辅助生殖技术整个流程的质量要求，以获得高质量的胚胎。目前常规的检测手段是鼠胚试验(Mouse embryo assay，MEA)，其基本指标是囊胚形成率。然而这些指标已不能完全符合辅助生殖技术质量标准的要求。例如，小鼠受精卵在低氧浓度(5％)的条件下培养能获得更好的胚胎发育力，但是小鼠受精卵在5％和20％氧浓度的条件下培养96小时都能获得相同的囊胚形成率。这种传统的标准也不能鉴别不同培养条件、培养液种类、器械耗材、操作流程等因素对胚胎发育的影响。因此，需要进一步改良完善MEA，检测从配子到胚胎移植的外部因素，以保证配子正常受精和胚胎体外发育，获得优质胚胎用于胚胎移植。基于这个要求，本发明一种辅助生殖技术用鼠胚试验囊胚细胞染色和计数试剂盒充分优化了各个试剂，合理搭配，是一种有效实用的检测手段，用于评估辅助生殖技术整个流程中外部因素的质量控制。

发明内容

发明目的：本发明的目的是提供一种检测试剂盒，具体地说涉及一种辅助生殖技术用鼠胚试验囊胚细胞染色和计数试剂盒，为评估辅助生殖技术整个流程中外部因素的质量控制提供一种有效敏感的检测手段。

技术方案：为实现上述目的，本发明采用下述技术方案：

一种辅助生殖技术用鼠胚试验囊胚细胞染色和计数试剂盒，由9种试剂组成。

优选地，所述9种试剂中的胚胎漂洗液由137毫摩尔氯化钠、2.7毫摩尔氯化钾、10毫摩尔磷酸氢二钠、1.8毫摩尔磷酸二氢钾、0.01％(体积/体积)TWEEN-20和水组成，其pH是7.4。

具体配制方法如下：根据需要胚胎漂洗液的体积，计数出各成分的体积或重量。按以下顺序配制：

1)称量氯化钠、氯化钾、磷酸氢二钠和磷酸二氢钾粉末，加相应体积的水，室温下采用磁力或其它搅拌方式下使粉末充分溶解；

2)按体积比加TWEEN-20按计数出的其它成分的或重量，加入并充分混匀；

3)酸碱滴定，调整pH值至7.4，过滤去杂质；

4)分装，2-8℃储存，待用。

优选地，所述9种特殊的试剂中的胚胎固定液由137毫摩尔氯化钠、2.7毫摩尔氯化钾、10毫摩尔磷酸氢二钠、1.8毫摩尔磷酸二氢钾、加2％多聚甲醛组成(pH值为7.4)；

具体配制方法如下：

根据需要胚胎固定液的体积，计数出各成分的体积或重量，按以下顺序配制；

1)称量多聚甲醛粉末，加相应体积的水，及1：1000体积的1毫摩尔氢氧化钠(NaOH)，加温在50-70℃，采用磁力或其它搅拌方式下使多聚甲醛粉末充分溶解；

2)按计数出的重量，称量氯化钠、氯化钾、磷酸氢二钠和磷酸二氢钾粉末，加入并充分混匀；