[发明专利]一种卵细胞激活培养液及其使用方法

权利要求书

1.一种卵细胞激活培养液，其特征在于，所述卵细胞激活培养液由基础培养液和以下浓度的组分组成：

所述基础培养液包含以下组分：无机盐缓冲液、葡萄糖、乳酸钠、丙酮酸钠、氨基酸、丙氨酰-谷氨酰胺、牛磺酸、四元羧酸乙二胺四乙酸，且所述无机盐缓冲液、葡萄糖、乳酸钠、丙酮酸钠、氨基酸、丙氨酰-谷氨酰胺、牛磺酸、四元羧酸乙二胺四乙酸的摩尔比为(94.25-160.4):(0.1-6):(1-22):(0.01-1.1):(0.07-4.2):(0.1-2.2):(0.01-0.6):(0.001-0.05)；

所述无机盐缓冲液包含以下组分：氯化钠、氯化钾、磷酸二氢钠、硫酸镁、碳酸氢钠和氯化钙，且所述氯化钠、氯化钾、磷酸二氢钠、硫酸镁、碳酸氢钠和氯化钙的摩尔比为(80-110):(3.5-8):(0.05-1.2):(0.2-3.2):(10-35):(0.5-3)；所述钙离子载体为A23187钙离子载体。

2.根据权利要求1所述的卵细胞激活培养液，其特征在于，所述卵细胞激活培养液由基础培养液和以下浓度的组分组成：

3.根据权利要求1-2任一项所述的卵细胞激活培养液，其特征在于，所述基础培养液包含以下组分：无机盐缓冲液、葡萄糖、乳酸钠、丙酮酸钠、氨基酸、丙氨酰-谷氨酰胺、牛磺酸、四元羧酸乙二胺四乙酸，且所述无机盐缓冲液、葡萄糖、乳酸钠、丙酮酸钠、氨基酸、丙氨酰-谷氨酰胺、牛磺酸、四元羧酸乙二胺四乙酸的摩尔比为(112.5-134.6):(0.4-0.7):(9-11):(0.3-0.4):(0.63-1.05):(0.8-1.2):(0.08-0.12):(0.008-0.012)。

4.根据权利要求1-2任一项所述的卵细胞激活培养液，其特征在于，所述无机盐缓冲液包含以下组分：氯化钠、氯化钾、磷酸二氢钠、硫酸镁、碳酸氢钠和氯化钙，且所述氯化钠、氯化钾、磷酸二氢钠、硫酸镁、碳酸氢钠和氯化钙的摩尔比为(85-95):(5-6):(0.2-0.4):(0.8-1.2):(20-30):(1.5-2)。

5.根据权利要求1所述的卵细胞激活培养液，其特征在于，所述氨基酸包括丙氨酸、天门冬氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、甘氨酸、脯氨酸、丝氨酸，且所述丙氨酸、天门冬氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、甘氨酸、脯氨酸、丝氨酸的摩尔比为(0.01-0.16):(0.01-0.16):(0.01-0.16):(0.01-0.16):(0.01-0.16):(0.01-0.16):(0.01-0.16)。

6.根据权利要求5所述的卵细胞激活培养液，其特征在于，所述丙氨酸、天门冬氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、甘氨酸、脯氨酸、丝氨酸的摩尔比为(0.09-0.11):(0.09-0.11):(0.09-0.11):(0.09-0.11):(0.09-0.11):(0.09-0.11):(0.09-0.11)。

7.根据权利要求1-2任一项所述的卵细胞激活培养液，其特征在于，所述卵细胞激活培养液中还含有杀菌剂。

8.根据权利要求7所述的卵细胞激活培养液，其特征在于，所述杀菌剂为硫酸庆大霉素，且所述卵细胞激活培养液中硫酸庆大霉素的含量为20-100ug/ml。

9.根据权利要求7所述的卵细胞激活培养液，其特征在于，且所述卵细胞激活培养液中硫酸庆大霉素的含量为40-60ug/ml。

10.根据权利要求1-9任一项所述的卵细胞激活培养液的使用方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将权利要求1-9任一项所述的激活培养液加入培养器皿中或者制作微滴，液体表面覆盖培养用矿物油；

(2)将步骤(1)中的培养器皿或微滴于37℃，6％CO₂，湿度为95％的培养箱中平衡5～8h；

(3)将卵子、ICSI后的卵子或者受精卵，放置于经步骤(2)平衡好的激活培养液中，于37℃，6％CO₂，湿度为95％的培养箱中培养5-30min；

(4)将激活后的卵子、ICSI后的卵子或者受精卵用所述激活培养液涮洗，然后转入干净的激活培养液里，放入相应培养箱中培养。