[发明专利]制备单链长探针的方法、去除核糖体RNA的方法和试剂盒

权利要求书

1.一种制备单链长探针的方法，其特征在于，包括：

通过反转录获得cDNA样本，所述cDNA样本包含核糖体RNA的反转录产物；

基于所述cDNA样本，利用引物对所述cDNA样本进行特异性扩增，以便获得扩增产物，所述引物能够特异性靶向所述核糖体RNA的反转录产物，所述扩增产物包括互补的两条链；

去除所述扩增产物中的一条链，以便获得所述单链长探针；

其中，所述引物包括第一引物和第二引物，所述第一引物5’端携带有磷酸化修饰，所述第二引物上含有至少一个硫代修饰。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述引物能够特异性靶向所述核糖体RNA保守区域的反转录产物，所述核糖体RNA来自于至少一个物种；

任选地，所述核糖体RNA保守区域包括18S rRNA、28S rRNA。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第二引物5’端携带有封闭基团；

任选地，所述封闭基团包括选自生物素、NH₂基团、荧光基团中的至少一种；

任选地，所述引物包括SEQ ID NO:1～SEQ ID NO:24；

任选地，所述cDNA样本通过总RNA反转录获得。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述硫代修饰包括选自甲基硫酸型修饰、硫代磷酸型修饰中的至少一种，优选为硫代磷酸型修饰；

优选的，所述第二引物在靠近5’端含有3-5个连续的硫代修饰。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，利用核酸外切酶对所述扩增产物进行消化处理，以便去除所述扩增产物中的一条链；

任选地，所述核酸外切酶为lambda核酸外切酶。

6.一种单链长探针，其特征在于，所述单链长探针根据权利要求1～5任一项所述的方法制备获得。

7.单链长探针在核糖体RNA去除领域的用途，所述单链长探针为权利要求1～5任一项所述的单链长探针或者为权利要求6所述的单链长探针。

8.一种去除RNA样本中的核糖体RNA的方法，其特征在于，包括：

将所述RNA样本和单链长探针混合，使得所述单链长探针与所述RNA样本中的核糖体RNA杂交，以便获得第一产物，所述第一产物中含有核糖体RNA-单链长探针杂交产物，所述单链长探针为根据要求1～5任一项所述的方法制备的单链长探针或者为权利要求6所述的单链长探针；

去除所述第一产物中的核糖体RNA，以便获得第二产物；

去除所述第二产物中的所述单链长探针，以便获得第三产物；

任选地，所述RNA样本为总RNA。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，利用核酸核酸酶去除所述第一产物中的核糖体RNA；优选所述核糖核酸酶为RNase H酶；

任选地，利用脱氧核糖核酸酶去除所述第二产物中的所述单链长探针；优选所述脱氧核糖核酸酶为DNase I酶。

10.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括SEQ ID NO:1～SEQ ID NO:24；

任选地，所述试剂盒进一步包括下列中的至少一种：

lambda核酸外切酶、RNase H酶、DNase I酶。