[发明专利]一种双启动子表达载体及其构建方法

权利要求书

1.一种双启动子表达载体，其特征在于，该载体基因组中包含有原核启动子T7序列、核糖体结合位点和T7终止序列；

以真核表达载体为出发载体，利用基因工程技术构建获得；

所构建的双启动子表达载体中，T7启动子序列位于出发载体的真核表达载体的启动子下游，核糖体结合位点位于T7启动子序列下游，T7终止序列位于出发载体的真核表达载体筛选标记下游；

具体构建时，通过将原核启动子T7序列、核糖体结合位点RBS和T7终止序列或者启动子T7序列与核糖体结合位点RBS的连接序列、T7终止序列重组至真核表达载体构建获得；

所述启动子T7序列为：TAATACGACTCACTATA，

所述RBS序列为：GAAGGA；

所述启动子T7序列与核糖体结合位点RBS的连接序列如SEQ ID NO.1所示，具体为：TAATACGACTCACTATAGGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTCTAGAAATAATTTTGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACC；

所述T7终止序列为如SEQ ID NO.2所示，具体为：

CTAGCATAACCCCTTGGGGCCTCTAAACGGGTCTTGAGGGGTTTTTTG。

2.权利要求1所述双启动子表达载体的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）获得启动子T7序列、核糖体结合位点RBS、T7终止序列，或者启动子T7序列与核糖体结合位点RBS的连接序列、T7终止序列，备用；

（2）以真核表达载体为出发载体，利用基因工程技术将启动子T7序列、核糖体结合位点RBS和T7终止序列或者启动子T7序列与核糖体结合位点RBS的连接序列、T7终止序列重组至真核表达载体构建获得。

3.如权利要求1要求所述双启动子表达载体，其特征在于，所述真核表达载体，具体构建时，以pIRES-neo、pIRES-neo2、pIRES-neo3、pEGFP-C1、pcDNA1.1或pCHO1.0这些真核表达载体为出发载体。