[发明专利]一种呕吐毒素荧光免疫层析试纸条及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种呕吐毒素荧光免疫层析试纸条，其特征在于，包括底板，所述底板上贴有反应膜；反应膜的一端覆盖吸水垫，另一端依次覆盖结合垫和样品垫；所述反应膜的非覆盖面上沿横向设置有检测线和质控线；

所述结合垫上喷涂有聚集诱导发光荧光微球标记的呕吐毒素单克隆抗体的荧光探针；

所述检测线上包被有呕吐毒素完全抗原，所述质控线上包被有山羊抗鼠二抗抗体。

2.根据权利要求1所述的呕吐毒素荧光免疫层析试纸条，其特征在于，所述聚集诱导发光荧光微球标记的呕吐毒素单克隆抗体的荧光探针，是将活化后的聚集诱导发光荧光微球与呕吐毒素单克隆抗体按体积比8～12：1偶联后，加入牛血清蛋白(BSA)作封闭液得到。

3.根据权利要求2所述的呕吐毒素荧光免疫层析试纸条，其特征在于，所述聚集诱导发光荧光微球的活化方法为：向羧基化的聚集诱导发光荧光微球溶液中，加入由碳二亚胺(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)组成的活化剂进行活化得到；所述羧基化的聚集诱导发光荧光微球溶液与EDC和NHS的体积比为1～3：3：4；

所述聚集诱导发光荧光微球采用四联苯乙烯酸四甲酯制备而成。

4.根据权利要求1所述的呕吐毒素荧光免疫层析试纸条，其特征在于，所述呕吐毒素完全抗原是：以式(I)所示化合物为呕吐毒素半抗原，与载体蛋白偶联，得到呕吐毒素完全抗原；所述载体蛋白为鸡卵清白蛋白(OVA)或牛血清蛋白(BSA)；

其中，呕吐毒素半抗原为式(I)所示化合物：

5.根据权利要求4所述的呕吐毒素荧光免疫层析试纸条，其特征在于，所述呕吐毒素单克隆抗体是：以所述呕吐毒素完全抗原作为免疫原，去免疫动物发生特异性免疫反应后，获得呕吐毒素单克隆抗体。

6.根据权利要求4所述的呕吐毒素荧光免疫层析试纸条，其特征在于，所述呕吐毒素半抗原的制备方法如下：将呕吐毒素溶解于乙二醇二甲醚中，加入氢化钠将呕吐毒素的羧基活化后偶联上丁二酸酐，避免呕吐毒素4号位和5号位的羧基被取代，再利用3-溴丙酸甲酯取代呕吐毒素4号位和5号位羧基上的氢，再于碱性条件下还原丁二酸酐，即得。

7.权利要求1～6任一所述呕吐毒素荧光免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1.将呕吐毒素半抗原与载体蛋白偶联，得到呕吐毒素完全抗原；以该呕吐毒素完全抗原作为免疫原，去免疫动物发生特异性免疫反应后，获得呕吐毒素单克隆抗体；

S2.采用EDC和NHS活化后的羧基化的聚集诱导发光荧光微球，对呕吐毒素单克隆抗体进行标记，加入牛血清蛋白(BSA)溶液进行封闭，得到聚集诱导发光荧光微球标记的呕吐毒素单克隆抗体的荧光探针；

然后将聚集诱导发光荧光微球标记的呕吐毒素单克隆抗体的荧光探针喷涂于结合垫上；

S3.在反应膜的检测线位置包被呕吐毒素完全抗原，检测线包被浓度为0.6～1.4mg/mL；在反应膜的质控线位置包被山羊抗鼠二抗抗体，质控线包被浓度为1.6～2.4mg/mL；

S4.在底板上依次搭接样品垫、结合垫、反应膜和吸水垫，即得。

8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，步骤S2中，呕吐毒素单克隆抗体与聚集诱导发光荧光微球的质量体积比为1μg：6～14μL，于100～300rpm、24～26℃条件下进行偶联反应35～45min；

所述BSA溶液的用量为16～24μL，浓度为16％～24％。