[发明专利]基于菌丝特征和生化指标快速判断杏鲍菇菌种退化的方法及其应用

权利要求书

1.一种快速判断杏鲍菇菌种退化的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）测定菌丝生长速度、菌丝直径、菌丝分支量、菌株菌落形态：将杏鲍菇菌株接种至PDA培养基上，于25℃培养7d，进行菌种活化；将活化后的不同代数杏鲍菇菌株接种至PDA培养基上进行培养，与菌株第一代原种相比，菌丝的平均生长速度下降≥22%，菌丝直径下降≥16%，菌丝分支减少，菌丝生长停滞，菌落不规则隆起，菌丝稀薄边缘呈极不规则圆形，白色，棉絮状，判定为退化；

（2）测定纤维素酶分泌能力：菌落直径、变色圈直径以及酶指数分别在24.50～32.50mm、26.00～42.00mm、1.10～1.30EI，判定为退化；

（3）测定淀粉酶分泌能力：菌落直径、变色圈直径以及酶指数分别在52.00～70.00mm、13.50～26.00mm、0.25～0.37EI，判定为退化；

（4）锰过氧化物酶分泌能力：菌落直径、变色圈直径以及酶指数分别在52.00～71.00mm、13.50～26.00mm、0.25～0.37EI区间范围或者小于以上范围时，判定为退化；

（5）LBL脱色能力：脱色率在48.00%～55.00%区间范围内或者低于此范围时，判定为退化；

（6）分解栽培料的速度：杏鲍菇菌株菌丝在栽培料中的平均生长速度下降百分数≥7.5%，判定为退化。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述菌丝生长速度的测定方法为：菌丝萌发后每两天测定其生长速度，直至菌丝长满平板；菌丝生长的平均速度mm/d=长满平板的菌丝长度/菌丝长满平板的天数。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述菌丝直径、菌丝分支量、菌株菌落形态的观察方法为：将活化后的各代杏鲍菇菌株接种至PDA培养基上，于25℃培养，观察培养过程中菌落形态变化情况，直至菌丝长满平板，并挑取各代活化后杏鲍菇菌种PDA培养基上相同位置的培养基一小块，放置于载玻片上，制片后于40倍镜下观察菌丝形态，并用Image-Pro Plus软件测定各代菌丝直径。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述纤维素酶分泌能力、淀粉酶分泌能力、锰过氧化物酶分泌能力的测定方法为：将活化后的不同代数杏鲍菇菌株用孔径1cm的打孔器分别接种至刚果红-羧甲基纤维素钠培养基、PDA可溶性淀粉培养基、PDA-愈创木酚培养基中，于25℃条件下培养，第7d测定菌落直径以及变色圈直径，计算酶指数EI；EI = 变色圈直径/菌落直径，结果以5个重复实验的平均值±标准差来表示。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述刚果红-羧甲基纤维素钠培养基配方为：羧甲基纤维素钠2.0g/L，MgSO₄·7H₂O 1.88g/L，KH₂PO₄ 0.5g/L，蛋 白 胨2.0g/L，刚果红0.25g/L，琼脂粉15g/L；

所述PDA可溶性淀粉培养基配方为：马铃薯200g/L，葡萄糖10g/L，可溶性淀粉2g/L；

所述PDA-愈创木酚培养基配方为：马铃薯200g/L，葡萄糖10g/L，MgSO₄·7H₂O 1g/L，KH₂PO₄ 1g/L，维生素Ｂ₁ 0.02ｇ/L，琼脂15g/L，愈创木酚0.1g/L。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述LBL脱色能力的测定方法为：将保藏的各代杏鲍菇菌株接种至PDA培养基上进行活化，从活化后的不同代数杏鲍菇菌株的PDA培养基中移取5个直径为1cm的菌丝块于LBL液体培养基中，于25℃条件下进行液体培养，每代5个生物学重复；液体培养3d后取培养液10 ml，8000 r/min、4℃离心15 min，移取上清液于615 nm处测定吸光值，脱色率DR=（1－(A_{615nm strain}/A615_{nm blank}))×100%。