[发明专利]基于菌丝特征和生化指标快速判断杏鲍菇菌种退化的方法及其应用

说明书

本发明提供了一种基于菌丝特征与生化指标的杏鲍菇菌种衰退的方法及其应用。本申请的判断方法，通过杏鲍菇菌种连续传代培养，分析测定不同代数杏鲍菇菌种酶活性、菌丝特征，探讨杏鲍菇连续传代过程中的菌种退化情况，以明确杏鲍菇菌种可使用种代数及菌种出现衰退的菌丝特征及其酶活表现，为杏鲍菇工厂化栽培时菌种质量提供快速鉴定方法。利用菌丝特点及其平板显色法定性测定酶活适合于杏鲍菇菌种的快速检测，耗时短、成本低、结果稳定可靠，可用作工厂化菌种质量判断。

技术领域

本发明属于农业技术领域，具体涉及一种基于菌丝特征和生化指标快速判断杏鲍菇菌种退化的方法及其应用。

背景技术

杏鲍菇（Pleurotus eryngii）分类学定位属于真菌门，担子菌亚门，层菌纲，伞菌目，侧耳科。又名刺芹侧耳，含有丰富的蛋白质、维生素、碳水化合物等营养物质，以及锌、镁、钙、铜等矿质元素。杏鲍菇子实体肉质肥美厚实、质地脆嫩、味道清爽，是一种能够增强人体免疫功能，具有降血脂、美容、滋润肠道、抗癌等作用，集食、药、疗三大功能于一体的深受消费者喜爱的珍稀食用菌品种。目前，杏鲍菇主要来源于工厂化栽培，而影响工厂化栽培的关键问题就是菌种退化。菌种退化是指食用菌菌种群体经济性状发生劣变的现象，而导致产量、品质、抗性等方面发生了背离人类需要的变化。真菌在人工培养基上继代培养过程中会出现菌株退化现象，在外部形态上表现为菌丝细弱，气生菌丝稀疏，菌丝生长缓慢，容易被杂菌污染；生产上表现为出菇期推迟，成菇数目减少，出菇不整齐，产量下降等。从而造成巨大的人力、物力、财力的损失。大多数杏鲍菇生产工厂仍然采用的是子实体分离加菌种继代来保藏和使用菌种，但工厂对于杏鲍菇菌种是否退化没有一套快速判断的指标，运用较多的还是通过出菇产量进行判断，这种方法既耗费时间，也会使工厂的经济效益遭受重大影响。因此，寻找一套快速判断菌种退化的指标势在必行。

发明内容

目前对于杏鲍菇的研究主要集中于栽培技术、育种技术、活性物质分析方面，而对于杏鲍菇工厂生产中菌种退化问题的相关研究并没有实质性的进展；并且工厂对于菌种退化仍然停留在通过产量的变化来进行判断，费时费力。因此，本实验通过对退化菌株进行菌丝特征以及生理生化指标的研究，旨在提供一种快速判断杏鲍菇菌种退化的方法。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

（1）测定菌丝生长速度、菌丝直径、菌丝分支量、菌株菌落形态：将杏鲍菇菌株接种至PDA培养基上，于25℃培养7d，进行菌种活化；将活化后的不同代数杏鲍菇菌株接种至PDA培养基上进行培养，与菌株第一代原种相比，菌丝的平均生长速度下降≥22%，菌丝直径下降≥16%，菌丝分支减少，菌丝生长停滞，菌落不规则隆起，菌丝稀薄边缘呈极不规则圆形，白色，棉絮状，判定为退化；

（2）测定纤维素酶分泌能力：菌落直径、变色圈直径以及酶指数分别在24.50～32.50mm、26.00～42.00mm、1.10～1.30EI，判定为退化；

（3）测定淀粉酶分泌能力：菌落直径、变色圈直径以及酶指数分别在52.00～70.00mm、13.50～26.00mm、0.25～0.37EI，判定为退化；

（4）锰过氧化物酶分泌能力：菌落直径、变色圈直径以及酶指数分别在52.00～71.00mm、13.50～26.00mm、0.25～0.37EI区间范围或者小于以上范围时，判定为退化；

（5）LBL脱色能力：脱色率在48.00%～55.00%区间范围内或者低于此范围时，判定为退化；

（6）分解栽培料的速度：杏鲍菇菌株菌丝在栽培料中的平均生长速度下降百分数≥7.5%，判定为退化。

所述菌丝生长速度的测定方法为：菌丝萌发后每两天测定其生长速度，直至菌丝长满平板；菌丝生长的平均速度mm/d=长满平板的菌丝长度/菌丝长满平板的天数。