[发明专利]一种用于诊断FHT/MP/HPS三重PCR试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.一种用于诊断FHT/MP/HPS三重PCR试剂盒，其特征在于，包括裂解液、扩增反应混合液、阴性对照和阳性对照；其中，所述裂解液的成分为DNAiso Reagent；所述扩增反应混合液包含灭菌三蒸水、PCR Buffer、dNTP、FHT-F上游引物、FHT-R下游引物、MP-F上游引物、MP-R下游引物、HPS-F上游引物、HPS-R下游引物和rTaq DNA聚合酶；所述阴性对照为灭菌三蒸水；所述阳性对照为猪附红细胞体、猪肺炎支原体和副猪嗜血杆菌阳性质粒混合物；

其中，FHT为猪附红细胞体，MP为猪肺炎支原体，HPS为副猪嗜血杆菌；

FHT-F上游引物序列为：5’- TAACTTACTTATCTGAGGAA -3’

FHT-R下游引物序列为：5’-TTTAACGCGTTAGCTACA-3’

MP-F上游引物序列为：5’- ATTATTTAAAAATTTTAGA -3’

MP-R下游引物序列为：5’-AATTCGTAATTTTATGTT-3’

HPS-F上游引物序列为：5’-GACTTAAGTGAGATGTGAA-3’

HPS-R下游引物序列为：5’-AGTATTTTCCCAAGGGGCT-3’。

2.根据权利要求1所述的用于诊断FHT/MP/HPS三重PCR试剂盒，其特征在于，所述裂解液的成分为DNAiso Reagent，20个反应共计20 mL，装成1瓶；所述扩增反应混合液包含灭菌三蒸水、10×PCR Buffer、2.5 mmol·L-1dNTP、25 μmol·L-1 FHT-F上游引物、25 μmol·L-1 FHT-R下游引物、25 μmol·L-1 MP-F上游引物、25 μmol·L-1 MP-R下游引物、25 μmol·L-1 HPS-F上游引物、25 μmol·L-1 HPS-R下游引物和5U/μL rTaq DNA聚合酶，每个反应体积比为15.0︰2.5︰2︰0.5︰0.5︰0.5︰0.5︰0.5︰0.5︰0.5，共计23 μL，20个反应共计460μL，装成1管；所述阴性对照为灭菌三蒸水，20个反应共计2.0 mL，装成1瓶；所述阳性对照为猪附红细胞体、猪肺炎支原体和副猪嗜血杆菌阳性质粒混合物，20个反应共计40.0μL，装成1管。