[发明专利]一种四环素类抗生素降解基因tet(X)的优化及其在真核表达系统中的应用

权利要求书

1.一种编码四环素类抗生素降解酶的优化基因tet(X)^*，其特征在于，该基因具有如SEQID NO：2所示的核苷酸优化序列。

2.一种能分泌四环素类抗生素降解酶Tet(X)的工程酵母，其特征在于，该工程酵母含有权利要求1所述的优化基因tet(X)^*。

3.一种能分泌四环素类抗生素降解酶Tet(X)的工程酵母的构建方法，其特征在于，以权利要求1所述的优化基因tet(X)^*为目的基因，以pPIC9K为载体，以毕赤酵母GS115为宿主，通过基因工程手段获得。

4.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、将优化基因tet(X)^*插入到pPIC9K质粒中，构建重组质粒；

S2、将毕赤酵母GS115制备成GS115感受态细胞；

S3、将步骤S1的重组质粒转化到步骤S2的GS115感受态细胞中，筛选阳性转化子得到工程酵母。

5.根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于，步骤S1的重组质粒在转化前先进行线性化处理，得到线性化重组质粒后再将其转化到步骤S2的GS115感受态细胞中。

6.根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于，步骤S2的GS115感受态细胞在制备过程中使用了1M的DTT。

7.根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于，步骤S3采用电转化法将重组质粒转化到GS115感受态细胞中，电转化所采用的电压为1500-2000V，放电时间为4-6ms。

8.根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于，步骤S1中，重组质粒的构建方法为：将优化基因tet(X)^*插入到pPIC9K载体的EcoRI酶切位点和NotI酶切位点之间。

9.根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于，步骤S3所述筛选阳性转化子的原则为：先使用不含G418抗性的MD空白板筛选阳性转化子，待转化子在MD空白板上长出后再用含G418的MD筛选多拷贝的转化子。

10.权利要求2所述的工程酵母在降解四环素类抗生素中的应用。