[发明专利]一种用于准确测定血清中胆汁酸浓度的质谱试剂盒

说明书

一种用于准确测定血清中胆汁酸浓度的质谱试剂盒，其特征在于：包括含有15种胆汁酸的校准品，脱氧胆酸‑d4、甘氨脱氧胆酸‑d4和牛磺脱氧胆酸‑d4的内标，15种胆汁酸的质控品，提取液，流动相，复溶液。具有无需进行复杂的净化提纯步骤，而且所需样本量小，可与液相色谱仪串联质谱仪配套使用，应用于临床样本的检验；同时，该产品能同时检测15种不同结构的胆汁酸，达到单样本多指标同步检测功能，具有准确率高、检测时间短、试剂耗用量少、操作方便等特点；此外，测量结果可直接溯源至参考系统，从而保证其测量结果的准确性的优点。

技术领域

本发明涉及医学检验技术领域，具体涉及一种用于准确测定血清中胆汁酸浓度的质谱试剂盒。

背景技术

胆汁酸(bilo acid，BA)是胆汁的主要成分，由肝脏合成，是内源性胆固醇的主要代谢去路；也是脂类物质消化、吸收必不可少的物质。胆汁酸按结构分为：游离型胆汁酸，包括胆酸(cholic acid，CA)、脱氧胆酸(deoxycholic acid，DCA)、鹅脱氧胆酸(chenodeoxycholic acid，CDCA)、熊脱氧胆酸(ursodeoxycholic acid，UDCA)和石胆酸(1ithocholic acid，LCA)等；结合型胆汁酸，主要是游离型胆汁酸与甘氨酸或牛磺酸结合的产物。按来源分为初级胆汁酸(肝细胞内合成)和次级胆汁酸(肠道中合成)。人体胆汁酸代谢异常与肝胆系统疾病以及能引起胆汁酸代谢异常的其它疾病如动脉粥炎硬化、高血压等多种疾病的发生相关，血清胆汁酸的成分及其含量的检测，对于了解机体胆汁酸的代谢特点具有重要的临床意义。

肝脏在胆汁酸代谢中占重要地位，肝细胞与胆汁酸的生物合成、分泌、摄取、加工和转化有密切关系。当肝细胞损伤或胆道阻塞时都会引起胆汁酸代谢的改变，因此，胆汁酸是反映各种原发性和继发性肝损伤的灵敏指标。每个人的BA水平都随着生理和病理状态的变化而发生改变，且不同疾病时各种胆汁酸变化的趋势和程度不同。BA的毒性与其生化特征如临界微粒浓度和疏水性有关，单羟基BA毒性最大，其次是双羟基BA，三羟基BA毒性最小。每一种BA都可各自作为配体激活其相应的受体，这些受体包括TGR5、FXR、PXR、PPARα、CAR、VDR等。因此，血清中胆汁酸的种类和浓度的测定在研究胆汁酸诱导的肝胆疾病的发病机理及各种肝损伤的诊断与鉴别诊断中具有不可替代的作用，检测每一种BA的体内水平而非简单地定量总BA含量，对于了解BA相关的生理和病理状态是非常重要的。

生物体液中胆汁酸种类多，含量低，结构上具有相似性(如CDCA、DCA、UDCA)，对其测定比较困难，目前只开展总胆汁酸检测，临床上胆汁酸的测定方法主要有循环酶法、高效液相色谱法(HPLC)、毛细管区带电泳、电动色谱、气相色谱(GC)、气质联用法(GC/MS)和液质联用法(LC-MS/MS)。气相色谱和GC-MS已被用于定性和定量分析BA。GC-MS分析BA异构体时具备高的选择性和分辨率。然而，这个技术受到诸多限制，主要是复杂的样品制备，衍生化，尤其是需将结合型BA水解成非结合形式才能进行分析。因此，尽管液相色谱分辨率不如GC，可能不能分离所有的BA异构体，高效液相色谱(HPLC)方法仍然适用更广。高效液相串联紫外检测(HPLC-UV)法常被用来测定生物基质中的BA。这个方法的缺点是在复杂生物基质中UV检测的灵敏度和特异性不足。HPLC可串联更灵敏和选择性更高的检测器进行使用，如荧光检测器。然而荧光检测法需复杂的衍生化技术而不能推广。LC-MS/MS是近年来迅速发展的定量分析技术，由于具有的高选择性、高灵敏度、样品处理简单和自动化程度高的特点，日渐成为生物样品中微量物质检测的首选方法，同时，由于该技术具有精密度好，准确度高，特异性强等优点，也被用做参考测量程序的建立及校准常规检测系统，保证检验结果的准确性。目前，国内质谱技术用于胆汁酸谱检测主要集中在第三方检测公司和少数三甲医院。质谱临床检验方法均为实验室自行建立的方法((laboratory developed tests,LDT)，采用的试剂多为非试剂盒产品，检测方法难以溯源到参考物质或参考方法，检测结果的准确度、重复性、时间可比性有待临床进一步验证。因此，迫切需要商品化的质谱检测试剂盒。

发明内容