[发明专利]一种用于检测山羊鼻内肿瘤病毒的荧光PCR引物、探针及试剂盒在审
申请号: | 202010013356.4 | 申请日: | 2020-01-07 |
公开(公告)号: | CN111004868A | 公开(公告)日: | 2020-04-14 |
发明(设计)人: | 翟少伦;肖霜艳;翟颀;温肖会;魏文康;吕殿红;周秀蓉;贾春玲 | 申请(专利权)人: | 广东省农业科学院动物卫生研究所 |
主分类号: | C12Q1/70 | 分类号: | C12Q1/70;C12Q1/6851;C12N15/11 |
代理公司: | 广州嘉权专利商标事务所有限公司 44205 | 代理人: | 郑莹 |
地址: | 510640 广*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 用于 检测 山羊 肿瘤 病毒 荧光 pcr 引物 探针 试剂盒 | ||
本发明公开了一种用于检测山羊鼻内肿瘤病毒的荧光PCR引物、探针及试剂盒。本发明所研制的山羊鼻内肿瘤病毒荧光PCR检测试剂盒,具有特异性强、灵敏度高、省时省力的优点。根据山羊鼻内肿瘤病毒特异性区域设计合成一对特异性引物,能够特异性扩增出山羊鼻内肿瘤病毒基因片段;山羊鼻内肿瘤病毒的诊断、流行病学调查、监测净化等方面提供了相应的技术支持与帮助。
技术领域
本发明涉及病原微生物的检测领域,具体涉及一种用于检测山羊鼻内肿瘤病毒的荧光 PCR引物、探针及试剂盒。
背景技术
羊鼻内肿瘤多是引起腺瘤,临床上多表现为鼻腔息肉、流鼻液、鼻腔肿瘤。如果不及时处理,羊只最终呼吸困难,窒息死亡。该病发病率不高,在5-15%之间,但死亡率高达100%。该病呈世界性流行,在我国多发于内蒙古、陕西、四川、重庆等地。近年来,该病有南移趋势。我国南方的贵州、福建、湖南、广东等地陆续报道。
羊外源性逆转录病毒是一类引起羊肿瘤性疾病的重要病原。其中在山羊群中常流行的是山羊鼻内肿瘤病毒(Enzootic nasal tumor virus 2,ENTV-2),而在绵羊群中流行的是绵羊鼻内肿瘤病毒(Enzootic nasal tumor virus 1,ENTV-1)和绵羊肺腺瘤病毒(Jaagsiekte Sheep Retrovirus,JSRV)。羊内源性逆转录病毒(endogenous JaagsiekteSheep Retrovirus,enJSRV) 多存在于羊基因组中,目前认为其不能产生传染性的病毒粒子,但对羊的生殖发育起到重要的作用。在基因组水平上,羊外源性逆转录病毒和内源性逆转录病毒同源性很近,高达95%以上。因此,研发一种PCR试剂盒用于山羊鼻内肿瘤病毒的精准诊断非常必要。
发明内容
本发明的目的在于提供一种用于检测山羊鼻内肿瘤病毒的荧光PCR引物、探针及试剂盒以及使用该试剂盒对山羊鼻内肿瘤病毒进行快速检测的方法。
本发明所采取的技术方案是:
本发明首先提供一种用于检测山羊鼻内肿瘤病毒的荧光PCR引物,该引物能扩增基因一段山羊鼻内肿瘤病毒的保守序列,所述引物组的核苷酸序列为:
ENTV2-F 5’-ATGGCAATAGTTTATATCTGCAAT-3’;
ENTV2-R 5’-GATGGCCTTGTATCAACATAAATGG-3’。
本发明还提供一种用于检测山羊鼻内肿瘤病毒的荧光PCR探针,其核苷酸序列如下:
5’-ATATAAGAATCCCGTAACACCTACATCTC-3’。
进一步的,所述探针序列5’端标记的荧光基团为FAM,探针序列3’端标记的淬灭基团为BHQ。
本发明还提供一种用于检测山羊鼻内肿瘤病毒的荧光PCR试剂盒,所述试剂盒包含前面所述的PCR引物组和前面所述的探针。
进一步的,试剂盒还包括反转录混合酶、缓冲液。
本发明还提供前面所述引物组在检测山羊鼻内肿瘤病毒的荧光PCR试剂盒中的应用,
(1)核酸提取:提取待检样品中的RNA;
(2)荧光定量PCR:以提取的核酸为模板,用前面所述引物组ENTV2-F、ENTV2-R和前面所述探针进行荧光定量PCR,获得扩增曲线;
(3)结果判断:对扩增曲线进行分析,以确定样本是否含有山羊鼻内肿瘤病毒。
进一步的,步骤(2)荧光PCR反应程序为:50℃反转录30min;94℃预变性2min;98℃变性10s,53℃退火延伸30s,共计45个循环。
进一步的,步骤(2)荧光PCR反应体系
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