[发明专利]一种利用工业色谱技术制备二氢黄酮苷类化合物的方法

说明书

本发明公开了一种利用工业色谱技术制备二氢黄酮苷类化合物的方法，该方法包括制备总黄酮苷提取物样品溶液，采用动态轴向压缩工业色谱纯化，双波长紫外在线检测器检测分离情况；根据出峰时间和色谱峰的高度确定二氢黄酮苷类化合物的洗脱液收集起止时间，洗脱液经减压浓缩、真空干燥。制备的二氢黄酮苷类化合物纯度在98.5％以上；可实现分离过程实时在线检测，工艺重现性好、操作简单、制备时间短，且有机溶剂用量少、经济环保，可大批量工业化生产。

技术领域

本发明属于中药活性成分分离纯化技术领域，特别涉及一种利用工业色谱技术制备二氢黄酮苷类化合物的方法。

背景技术

新北美圣草苷是一种二氢黄酮苷类化合物，广泛存在于枳实、枳壳、甜橙、化州柚、化橘红、常山胡柚、骨碎补等中药材中，且作为活性成分或代表性成分在三七伤药片、骨刺片、强骨胶囊、红珠胶囊、疏丹颗粒、伤湿丸等品种中进行含量控制。但对于新北美圣草苷等低含量成分研究还不充分，且由于该成分的含量低、分离过程繁琐复杂等问题，导致目前新北美圣草苷成分无法大量制备，这严重限制了含新北美圣草苷成分的药材及其相关产品质量控制。因而开发一种简单、快速分离纯化高纯度新北美圣草苷成分的方法是当前研究的重点。

经查阅文献发现：韦锦宁等报道了枳实总黄酮苷提取物中含新北美圣草苷(枳实总黄酮苷提取物特征图谱研究.江西中医药大学学报,2016,28(5):72-74,87)，但未见报道该成分的制备方法；岳春华等报道了从骨碎补中制备新北美圣草苷和柚皮苷对照品的方法(从骨碎补中制备新北美圣草苷和柚皮苷对照品的研究.中草药,2008,(4):529-531)，但该制备方法批量比较小，制备过程繁琐，生产周期长，无法实现大批量的制备。经查阅专利，发现中国专利CN102397374B、CN102397373B、CN102406734B、CN102048874B公开了一种水煎煮提取的枳实或枳壳总黄酮提取物及其用途，但未发现有制备新北美圣草苷单体化合物的现有技术。

发明内容

本发明提供了一种从黄酮苷提取物中制备二氢黄酮苷类化合物新北美圣草苷单体化合物的方法，具备有机溶剂用量少、制备过程简单、生产周期短、易于工业化的特点。

一种利用工业色谱技术制备二氢黄酮苷类化合物新北美圣草苷的方法，包括以下步骤：

(1)样品溶液制备：取总黄酮苷提取物，加入溶剂将其溶解并配成一定浓度的样品溶液，过滤备用；

(2)分离纯化干燥：将步骤(1)的样品溶液按一定进样量注入动态轴向压缩工业色谱中，有机溶剂洗脱，用双波长紫外在线检测器检测分离情况，根据新北美圣草苷成分的出峰时间及色谱峰高度，收集所制新北美圣草苷单体化合物的洗脱液，收集起止时间为105-165min，并将洗脱液浓缩、干燥。

优选的，步骤(1)中，总黄酮苷提取物为枳实和/或枳壳的总黄酮苷提取物；和/或，总黄酮苷提取物中新北美圣草苷含量为0.5％-2.5％(W/W)；优选1.0％-2.0％(W/W)。

优选的，步骤(1)中，溶剂为0-10％(V/V)甲醇水溶液，如2％、5％、8％(V/V)；优选2％-5％(V/V)甲醇水溶液。

优选的，步骤(1)中，所述样品溶液浓度为70-100mg/mL；优选90-100mg/mL。

优选的，步骤(2)中，工业色谱填料为反相C18填料，优选ODS-A或ODS-AQ。

优选的，步骤(2)中，所述有机溶剂为甲醇、水、三氟乙酸的一种或多种；优选甲醇、水、三氟乙酸的混合溶液；三者体积比优选为30-40:70-60:0.3，例如40:60:0.3、30:70:0.3、35:65:0.3。

优选的，步骤(2)中，洗脱流速为2.5-10.0CV/h；优选5.0-7.5CV/h；进样量为100-110L。

优选的，步骤(2)中，紫外在线检测器的检测波长283nm，参比波长为210nm。