[发明专利]牛微小隐孢子虫特异性引物及其PCR检测方法和应用

权利要求书

1.一种牛微小隐孢子虫特异性引物，其特征在于：所述的特异性引物序列如下：

上游引物CpF：5’-AGTGGTTACAGGTGGGATGAGT-3’；

下游引物CpR：5’-GCGAGTTTCCTTGATTCATAGC-3’。

2.如权利要求1所述的特异性引物在检测牛微小隐孢子虫中的应用。

3.根据权利要求1所述的特异性引物在检测牛微小隐孢子虫的普通PCR检测方法，其特征在于：包括以下步骤：

1)提取待测样本的DNA获得扩增模板；

2)利用特异性引物对步骤1)获得的DNA样品进行PCR扩增，PCR反应体系如下：10×exTaq buffer(Mg²⁺free)1.25μL，MgCl₂(25mM)0.6μL，dNTP(2.5mM)1μL，上下游引物(10mM)各0.5μL，ex Taq酶(5U/μL)0.07μL，模板DNA 1μL，ddH₂O补至12μL；反应条件为：94℃5min；94℃45s、56℃30s、72℃1min，35个循环；72℃10min；

3)PCR产物的电泳检测：扩增产物经1％琼脂糖凝胶电泳检测，若电泳结果出现410bp左右的特异性条带，则待测样本中存在微小隐孢子虫。

4.根据权利要求1所述的特异性引物检测牛微小隐孢子虫的纳米PCR检测方法，其特征在于：包括以下步骤：

1)提取待测样本的DNA获得扩增模板；

2)利用特异性引物对步骤1)获得的DNA样品进行纳米PCR扩增，反应体系如下：2×Nano-QPCR buffer 6μL，上下游引物(10mM)各1μL，Taq enzyme mix(5U/μL)0.2μL，模板DNA1μL，ddH₂O补至12μL；反应条件为：94℃5min；94℃45s、56℃30s、72℃1min，35个循环；72℃10min；

3)PCR产物的电泳检测：扩增产物经1％琼脂糖凝胶电泳检测，若电泳结果出现410bp左右的特异性条带，则待测样本中存在微小隐孢子虫。

5.权利要求3或4所述的PCR检测方法在鉴别、诊断和预防牛微小隐孢子虫病中的应用。