[发明专利]脐带间充质干细胞的三维培养方法

说明书

本发明涉及一种脐带间充质干细胞的三维培养方法。该脐带间充质干细胞的三维培养方法包括以下步骤：将脐带间充质干细胞接种于细胞培养器中，然后在水平转速为20rpm～40rpm条件下旋转培养脐带间充质干细胞，其中，细胞培养器的底部的内表面为弧面，底部的内表面经抗细胞贴附处理。上述脐带间充质干细胞的三维培养方法能够提高脐带间充质干细胞所分泌外泌体的产量。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种脐带间充质干细胞的三维培养 方法。

背景技术

外泌体是由细胞经过“内吞-融合-外排”等一系列调控过程而形成，并主动 分泌至胞外的大小均一，分子直径为40nm～100nm的亚细胞双层膜囊泡，其内 含有与细胞来源相关的蛋白质、miRNA及mRNA等物质。外泌体既可以通过质 膜受体直接激活受体细胞，也可以转运蛋白质、miRNA及mRNA甚至细胞器进 入受体细胞内，同时也可以携带处于不同病例状态下的细胞所含有的特异性物 质，从而在生理学和病理学上都发挥着重要的作用。

脐带间充质干细胞(umbilical cord mesenchymal stem cells,UC-MSCs)，具 有自我更新和多向分化潜能，在一定条件下能分化成多种成体细胞，可参与受 损组织的再生修复。近年来，随着对间充质干细胞研究的不断深入，其分泌的 外泌体已成为研究热点。

传统的脐带间充质干细胞培养采用二维培养方法(平面法)，培养面的面积 限制了干细胞的扩增倍数，产量少，不能满足市场对外泌体的需求。

发明内容

基于此，有必要提供一种脐带间充质干细胞的三维培养方法，该以三维培 养方法培养的脐带间充质干细胞分泌外泌体的量高。

一种脐带间充质干细胞的三维培养方法，包括以下步骤：

将脐带间充质干细胞接种于细胞培养器中，然后在水平转速为20rpm～40 rpm条件下旋转培养所述脐带间充质干细胞，其中，所述细胞培养器的底部的内 表面为弧面，所述底部的内表面经抗细胞贴附处理。

上述脐带间充质干细胞的三维培养方法通过将脐带间充质干细胞接种搭配 底部经抗细胞贴附处理的细胞培养器中，并在水平转速为20rpm～40rpm条件下 旋转培养，使得脐带间充质干细胞在培养过程中维持细胞团块的三维构象从而 模拟细胞在体内的生长环境，使脐带间充质干细胞之间接触紧密，分子信号交 流更加频繁，促进干细胞各种细胞因子表达水平的提高，提高外泌体表达量， 提高外泌体的产量高。

在其中一个实施例中，所述弧面为圆弧面，所述细胞培养器为U型细胞板。

在其中一个实施例中，所述旋转培养的水平转速为30rpm。

在其中一个实施例中，培养所述脐带间充质干细胞的培养基为以Ultroser G 替代血清的干细胞培养基。

在其中一个实施例中，所述干细胞培养基中Ultroser G的质量百分含量为 1.5％～2.5％。

在其中一个实施例中，所述将脐带间充质干细胞接种于细胞培养器中的步 骤中，接种密度为50个/μL～80个/μL。

在其中一个实施例中，在所述将脐带间充质干细胞接种于细胞培养器中的 步骤之后，还包括将接种在所述细胞培养器中的脐带间充质干细胞在37℃、20 rpm～40rpm条件下水平旋转孵育的步骤。

在其中一个实施例中，在所述孵育的步骤之后，还包括将孵育后的脐带间 充质干细胞在450rmp～550rmp的转速下离心2.5min～3.5min的步骤。

在其中一个实施例中，还包括以脐带为原料制备脐带间充质干细胞的步骤。

在其中一个实施例中，所述以脐带为原料制备脐带间充质干细胞的步骤包 括：