[发明专利]重组人促红细胞生成素的制备方法及其应用

说明书

本发明属于生物药品制剂领域，涉及治疗疟疾的药物制备技术领域，特别涉及一种重组人促红细胞生成素的制备方法及其作为治疗小鼠脑型疟疾口服药物的应用。所述的重组人促红细胞生成素是从柞蚕蛹或幼虫中表达制备获得，用柞蚕蛹制备rhEPO冻干粉，设备条件要求低，生产工艺简单，可以进行规模化生产，冻干粉中rhEPO的比活较高，适于用来开发脑型疟口服类的辅助治疗药物，具有实用价值。同时，也提高柞蚕蛹的利用价值，对柞蚕产业未来高效益、可持续发展具有重要意义。为儿童脑型疟疾辅助治疗药物的研究提供了新的途径。

技术领域

本发明属于生物药品制剂领域，涉及治疗疟疾的药物制备技术领域，特别涉及一种重组人促红细胞生成素的制备方法及其作为治疗小鼠实验性脑型疟疾口服药物的应用。

背景技术

恶性疟原虫（Plasmodium falciparum）感染人体并寄生在人体红细胞中，造成红细胞损伤，严重的感染可引发并发症，涉及血液、肝脏、肾脏和脑等组织损伤。脑型疟疾（Cerebral malaria，CM）是其中最严重的并发症之一，其发生在五岁以下非洲儿童中的死亡率在15-20%。大多数儿童脑型疟疾患者在出现中枢神经系统感染症状后的一至两天内死亡，即使幸存下来的儿童也往往伴有持续性神经功能缺损，产生认知、行为和运动功能障碍等神经系统后遗症。目前研究认为脑型疟疾最主要的病理变化特征是感染了疟原虫的红细胞黏附脑血管，导致脑组织局部微循环障碍和免疫病理损伤，致使血脑屏障受到破坏。虽然青蒿琥酯被推荐为治疗脑型疟首选药物，但这种治疗方案并没有解决脑型疟疾的临床症状问题。探索研究脑型疟疾辅助治疗药物，减少血脑屏障损伤，改善脑型疟的症状，降低死亡率仍具有重要意义。

人促红细胞生成素（Erythropoietin, EPO）是主要由人体肾脏分泌产生的一种多功能糖蛋白类细胞因子，主要作用是刺激骨髓生成红细胞。此外，研究表明它还具有多种非造血功能，如抗氧化、抗凋亡、调节炎症、促进血管生成等，对神经、大脑、心血管、肾脏及干细胞等细胞和器官具有保护作用。目前临床上已将重组人促红细胞生成素（rhEPO）用于个体治疗，rhEPO的一级结构包括166个氨基酸残基，与天然EPO蛋白相同。rhEPO主要是以静脉或皮下注射方式用于治疗患者因慢性肾功能衰竭、肿瘤化疗、艾滋病等原因引起的贫血症，至今为止尚没有将rhEPO用于脑型疟疾辅助治疗的公开技术。

目前市售的rhEPO一般是利用中国仓鼠卵巢细胞（CHO）通过大规模扩增培养表达生产的注射用基因工程产品，生产设备条件要求高，工艺复杂，产品价格较高。也有报道利用家蚕蛹表达rhEPO，重组家蚕杆状病毒、其表达的重组蛋白及其制备和应用（申请号201310636430.8），由于家蚕非蛹期滞育，经过短暂的蛹期便很快发育变态为成虫，不利于病毒的感染和基因的充分表达。柞蚕是我国特有的资源，柞蚕茧年产量在7万吨左右。柞蚕因以蛹期滞育越冬，可长期保存，且蛹体较大，被认为可开发成为高效的生物反应器 。现有技术没有利用柞蚕蛹或幼虫制备rhEPO样品的方法的报道。

发明内容

鉴于现有技术存在的缺陷，本发明的目的是提供一种重组人促红细胞生成素的制备方法及其在制备治疗小鼠脑型疟疾药物中的应用，所述的rhEPO是从柞蚕蛹或幼虫中表达制备获得。通过建立一种rhEPO作为药物治疗小鼠脑型疟疾的应用模型，为今后rhEPO作为口服药物用于辅助治疗人脑型疟疾提供技术和理论支持。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案。

一种重组人促红细胞生成素，所述的重组人促红细胞生成素是从柞蚕蛹或幼虫中表达制备获得。

一种重组人促红细胞生成素样品的制备方法，具体保护包括以下步骤。