[发明专利]一种鸭呼肠孤病毒、鸭细小病毒和鸭星状病毒三价卵黄抗体的制备方法

权利要求书

1.一种三价卵黄抗体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1、利用鸭呼肠孤病毒、鸭细小病毒和鸭星状病毒三联灭活疫苗免疫100日龄的海兰褐鸡，获得高免鸡蛋，去蛋清，用75％酒精进行表面消毒，得高免鸡蛋蛋黄；

S2、收集步骤S1获得的高免鸡蛋蛋黄，去除卵黄膜和系带后利用胶体磨进行破碎，得蛋黄液；

S3、将步骤S2得到的蛋黄液与0.1mol/L的pH为7.2～7.4的醋酸盐缓冲溶液以1：6～8的体积比混合，然后向其中加入总体积0.05～0.1％的聚乙二醇15-羟基硬脂酸酯，搅拌混合均匀，然后加入总体积0.3～0.5％的β-环糊精，充分搅拌，4℃静置1～2h，充分平衡后在4℃，4000r/min离心15～20min，收集上清液；

S4、将步骤S3收集的上清液进行纯化、浓缩，无菌处理，即得。

2.如权利要求1所述的三价卵黄抗体的制备方法，其特征在于，步骤S1中所述的鸭呼肠孤病毒、鸭细小病毒和鸭星状病毒三联灭活疫苗用传代细胞系LMH细胞生产。

3.如权利要求1所述的三价卵黄抗体的制备方法，其特征在于，步骤S1中所述高免鸡蛋蛋黄的具体制备方法为：给100日龄的海兰褐鸡皮下注射1mL鸭呼肠孤病毒、鸭细小病毒和鸭星状病毒三联灭活疫苗免疫，共免疫3次，每相邻两次免疫的时间间隔为21d，在最后一次免疫后5d收集鸡蛋，即得。

4.如权利要求1所述的三价卵黄抗体的制备方法，其特征在于，步骤S2中所述蛋黄液的具体制备方法为：将高免鸡蛋用75％酒精进行表面消毒，分离出蛋黄，过60目尼龙筛，去除卵黄膜和系带，然后置于胶体磨中研磨4～6min，即得。

5.如权利要求1所述的三价卵黄抗体的制备方法，其特征在于，步骤S3中所述醋酸盐缓冲液的制备过程为：每1000mL纯化水中溶解0.886g乙酸钠和2.82ml冰乙酸，然后利用1mol/L的NaOH溶液调节pH至4.8。

6.如权利要求1所述的三价卵黄抗体的制备方法，其特征在于，步骤S3中所述聚乙二醇15-羟基硬脂酸酯的终浓度为0.6～1.2％；所述β-环糊精的终浓度为1.0～2.0％。

7.如权利要求6所述的三价卵黄抗体的制备方法，其特征在于，步骤S3中所述聚乙二醇15-羟基硬脂酸酯的终浓度为0.8％；所述β-环糊精的终浓度为1.2％。

8.如权利要求1所述的三价卵黄抗体的制备方法，其特征在于，步骤S4中所述无菌处理具体操作为：将经纯化、浓缩后得到的浓缩液使用过滤精度为0.45μm的筒式滤芯精滤，再用过滤精度为0.20μm的筒式滤芯过滤除菌，无菌操作分装，即得。