[发明专利]一种鸭呼肠孤病毒、鸭细小病毒和鸭星状病毒三价卵黄抗体的制备方法

说明书

本发明属于兽用生物制品技术领域，具体涉及一种鸭呼肠孤病毒、鸭细小病毒和鸭星状病毒三价卵黄抗体的制备方法。本发明提供的三价卵黄抗体是利用鸭呼肠孤病毒、鸭细小病毒和鸭星状病毒三联灭活疫苗免疫鸡，制得高免鸡蛋，经过研磨破碎，混合搅拌，并对收集到的上清液进行纯化、浓缩、无菌处理制得。按照本发明方法制得的三价卵黄抗体，性质稳定、效价活性强，适合呼肠孤病毒、细小病毒和星状病毒三价精制卵黄抗体的大规模制备。

技术领域

本发明属于兽用生物制品技术领域，具体涉及一种鸭呼肠孤病毒、鸭细小病毒和鸭星状病毒三价卵黄抗体的制备方法。

背景技术

鸭呼肠孤病毒(DRV)、鸭细小病毒和鸭星状病毒(DAstv)目前是世界上的研究热点，对鸭、鹅均具有致病性，主要病变表现为脾脏坏死和肝脏出血，该病可直接引发养15日龄以内的雏鸭和雏鹅出现30％以上的死亡率，此外其临床上也常常与鸭疫李默是杆菌，大肠杆菌和星状病毒等并发感染，导致鸭和鹅出现明显呼吸道病，关节炎，及严重的产蛋下降及畸形蛋等问题。因此目前该病已经成为严重影响养鸭和养鹅产业的重大疫病之一。

卵黄抗体是指从免疫禽蛋中提取的针对特定抗原的抗体，由于卵黄中仅有 IgG类抗体，因此称其为卵黄免疫球蛋白IgG(yolk antibody)，简称为IgY。当机体受到外来抗原刺激后，法氏囊内的B细胞分化成为浆细胞，分泌特异性抗体进入血液循环，当血液流经卵巢时，特异性抗体(主要是IgG)在卵细胞中逐渐蓄积，形成卵黄抗体，IgG移行进入卵细胞是受体作用的结果，因而IgG可在卵细胞中大量蓄积，浓度高于血液中的IgG，单个卵黄(约15ml)中卵黄抗体含量可达200mg左右。再加之从卵黄中提取抗体较从动物血清中提取抗体简便，因此卵黄抗体具有明显的技术优势。

此外，卵黄抗体在多种环境中有较好的稳定性。在低于75℃条件下，卵黄抗体具有良好的热稳定性，90℃处理15min后，大部分卵黄抗体丧失结合活性，在pH4时，仅有少量卵黄抗体失去活性。在pH4～12范围内，卵黄抗体的活性几乎不受影响，在pH12时，卵黄抗体迅速失去结合活性。实验表明，卵黄抗体具有耐受反复冻融的特性，即使经过5次冻融，其抗原结合活性几乎不受影响。在室温下可保存6个月，4℃保存可达5年以上，活性仅下降5％左右。

由于具备上述优越的生物学、理化特性，因此卵黄抗体的制备与应用受到了越来越多的关注。然而由于现有技术的卵黄抗体生产工艺存在缺陷，因此极大的影响了产品品质，例如一些粗制抗体产品不仅抗体效价难以保证，而且通常会污染禽淋巴白血病病毒、网状内皮增生因子、大肠杆菌、沙门氏菌、支原体等外源性致病原。在注射抗体预防或者治疗疾病时，极有可能造成垂直传播病原或其他一些细菌、病毒的扩散甚至疾病的爆发，带来严重的经济损失。此外，由于这些粗制抗体的制造者往往试图通过添加大剂量的甲醛、青、链霉素等措施来延长其产品的保质期，增加所谓的使用“安全性”，但结果往往是造成更大的应激和严重的药物残留。而且粗制抗体中含有大量的脂蛋白及卵磷脂等大分子物质，这些物质没有任何治疗作用且体积大，粘稠度高，注射困难且难以吸收，注射后对机体的应激大，易造成过敏反应，是外源性致热原。注射后易造成注射部位局部组织出血、肿胀、坏死，坏死的组织会导致机体发热，而发热会造成机体神经调节、体液调节等功能的紊乱，从而导致发病群体采食量减少，抵抗力下降，继发其他疾病。另外一方面，卵黄抗体中存在的不饱和脂肪酸和磷脂类十分容易氧化变质，从而使卵黄抗体的保存期大大缩短，因此，建立一种可大量生产、产品纯度和活性高的提纯方法对卵黄抗体的广泛应用将具有重要意义。

目前对卵黄抗体的分离提纯主要是利用抗体蛋白的亲水性和疏水性进行分离。主要方法有盐析法、超滤浓缩法、层析法、离子交换层析法、正辛酸沉淀等。

发明内容