[发明专利]一种伪狂犬病毒弱毒株及应用在审
| 申请号： | 202010021958.4 | 申请日： | 2020-01-09 |
| 公开（公告）号： | CN111154733A | 公开（公告）日： | 2020-05-15 |
| 发明（设计）人： | 李守军;孙阳阳;张学贤;辛波;车艳杰 | 申请（专利权）人： | 天津瑞普生物技术股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N7/01 | 分类号： | C12N7/01;C12N15/869;A61K39/245;A61P31/22;C12R1/93 |
| 代理公司： | 天津合正知识产权代理有限公司 12229 | 代理人： | 马云云 |
| 地址： | 300308 天津市滨海*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 狂犬病毒 弱毒株 应用 | ||
1.一种伪狂犬病毒弱毒株，其特征在于，所述弱毒株是同时缺失了部分TK氨基酸序列、部分GE氨基酸序列、部分11K氨基酸序列以及gE基因第56位碱基至11K基因的103位碱基间的基因序列。
2.根据权利要求1所述的伪狂犬病毒弱毒株，其特征在于，所述弱毒株缺失部分的氨基酸序列如SEQ ID NO:1～SEQ ID NO:3所示，所述基因序列如SEQ ID NO:4所示。
3.一种如权利要求1所述的伪狂犬病毒弱毒株制备的伪狂犬病毒疫苗。
4.根据权利要求1所述的伪狂犬病毒弱毒株，其特征在于，该弱毒株的重组伪狂犬病毒的制备方法包括以下步骤：
(1)将pHA2质粒重组到猪伪狂犬病毒的TK基因内，获得rPRV；
(2)将rPRV基因组转化至大肠杆菌DH10B菌株，扩增获得pPRV；
(3)然后将pPRV转化至大肠杆菌GS1783中；
(4)通过Red/ET两步重组法在GS1783中缺失掉gE、11K基因；
(5)在步骤(4)获得的产物中提取质粒pPRV-dTK-dgE-d11K；
(6)将步骤(5)提取的质粒用脂质体转染法，转染至BHK-21细胞；
(7)提取感染性克隆质粒与转移载体共转染BHK-21细胞，通过同源重组将BAC质粒去掉，得到缺失TK、gE、11K中部分基因的重组伪狂犬病毒。
5.根据权利要求1所述的重组伪狂犬病毒弱毒株，其特征在于构建该重组伪狂犬病毒弱毒株的载体包括：伪狂犬病毒TK基因和11K基因的部分序列。
6.根据权利要求5所述的构建该重组伪狂犬病毒弱毒株的载体，其特征在于该载体还包括：CMV启动子控制下的EGFP基因。
7.根据权利要求2所述的伪狂犬病毒疫苗，其特征在于，该疫苗的免疫方式包括滴鼻和注射。
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