[发明专利]鉴别皱果苋与2种常见混淆品的分子特异性标记引物及方法

权利要求书

1.鉴别皱果苋与2种常见混淆品的分子特异性标记引物，其特征在于：所述引物包括如下：

鉴别皱果苋的上游特异性正向引物AvF：5’- CTTTTTGTTCCTATATAATCTAG - 3’；

鉴别白苋的上游特异性正向引物AaF：5’- CTAGTAAAAGTCAAAGTTAAGCG - 3’；

鉴别反枝苋的上游特异性正向引物ArF：5’- GACTCAATTCTTCAGTAATACCA - 3’；

下游通用反向引物matk-R：5’- TATAATAATGAGAAAGATTTCGG - 3’。

2.一种利用权利要求1所述的分子特异性标记引物用于鉴别皱果苋与2种常见混淆品的多重PCR方法，其特征在于：多重PCR体系总体积为20 μL，从皱果苋、白苋、反枝苋植物中提取10 ng的基因组DNA作为扩增模版，加入1μL 1×TransStart TopTaq DNA聚合酶，2μL10×TransStart TopTaq Buffer，dNTP 2.5mM，0.2μM下游通用反向引物matk-R和3个特异性上游正向引物AvF、AaF与ArF各0.1 μM，其余为无菌水；反应程序如下：在PCR仪中， 95°C预变性2分钟， 95°C 变性30 s， 51°C引物退火30s和72°C 延伸2分钟，进行32个循环；最后一个循环72°C 延伸7分钟。

3.一种利用权利要求1所述分子特异性标记引物用于鉴别皱果苋与2种常见混淆品的荧光定量PCR方法，其特征在于：以特异识别皱果苋的上游特异性正向引物AvF与下游反向引物AvR：5'-GATATTTTAGCTTTCCGTAA-3'；特异识别白苋的上游特异性正向引物AaF与下游反向引物AaR：5'-GCCAGAAAGCGATAAAGTAA-3'；特异识别反枝苋的上游特异性正向引物ArF与下游反向引物matk-R进行荧光定量PCR鉴别分析，构建荧光定量PCR；

反应体系如下：总体积为20 μL，从植物中提取10 ng的基因组DNA作为扩增模版，10μL2×SYBR Green Real-time PCR Master Mix，0.2μM 上游特异性正向引物AvF或AaF或ArF，0.2μM下游通用反向引物AvR或AaR或matk-R，其余为无菌水；反应程序如下：在实时定量PCR仪器中，50℃预变性2分钟， 95℃预变性10分钟；95℃变性15 s，引物退火58℃ 15s和在72℃延伸 30 s，40个循环。