[发明专利]猪血浆及肺泡液内艾地普林和磺胺甲噁唑的定量检测方法

权利要求书

1.猪血浆及肺泡液内艾地普林和磺胺甲噁唑的定量检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一：准备艾地普林和磺胺甲噁唑标准品溶液和待检测的样品提取液；

步骤二：绘制标准曲线，将3～5份不同浓度的艾地普林标准品溶液分别用于HPLC检测，然后进行洗脱处理，记录艾地普林标准品溶液色谱图和峰面积，进行线性回归分析，绘制得到标准曲线；

步骤三：分别用回收率和变异系数表示准确度和精密度，首先在空白猪血浆中以及肺泡灌洗液中加入高、中、低三个浓度的艾地普林和磺胺甲噁唑，按照待检测的样品提取液的提取方法制备样品净化液供HPLC检测，同一天内每个浓度重复5次，然后取平均值，计算日内相对误差为日内变异系数，每个浓度重复5天，然后计算平均值和相对误差，得到日间变异系数，回收率采用如公式(1)所示的单点校准法进行计算：

X＝AV/AsW×100％ (1)

式中：X-试样中待测物回收率；A-试样的峰面积；V-试样提取吹干后定容体积，单位mL；As-标准工作液的峰面积；W：试样体积，单位mL；

步骤四：绘制工作曲线，取空白猪血浆和肺泡灌洗液，在其中加入3～5份不同浓度的艾地普林和磺胺甲噁唑，按照提取检测的样品提取液的提取方法进行提取样品检测液供HPLC检测；重复三次后将所得峰面积与对应浓度作线性回归，绘制工作曲线并计算出艾地普林和磺胺甲噁唑在猪血浆和肺泡灌洗液中的回归方程和相关系数；

步骤五：实际样品测定和结果计算，猪单次注射艾地普林和磺胺甲噁唑复方注射液后，采集血浆和肺泡灌洗液，并将血浆和肺泡灌洗液进行提取和HPLC 检测，记录色谱图和峰面积，并以步骤四中所得的线性回归方程分别计算出采集的猪血浆中及肺泡灌洗液中艾地普林和磺胺甲噁唑的含量；

所述步骤一中待检测的样品提取液的制备方法为：向待检测的血浆和肺泡灌洗液加二氯甲烷及乙腈，经过涡旋和离心处理后取下层清夜，操作重复两次，并于氮气气氛下吹干，然后固相残渣用流动相复溶，复溶之后再加入正己烷进行去脂，最后将溶解液过膜，得到待检测的样品提取液；

所述二氯甲烷和乙腈的质量比为1:1；

HPLC检测条件为：色谱柱：Agilent ZORBAX SB-C18，250×4.6mm(i.d.)，5μm；流动相：A-0.1％三氟乙酸，C-甲醇；紫外检测波长：270nm；进样量：20μL；流速：1mL/min；柱温：30℃；

流动相洗脱方案如下：

2.根据权利要求1所述的猪血浆及肺泡液内艾地普林和磺胺甲噁唑的定量检测方法，其特征在于：所述步骤一中在氮气气氛下吹干时，氮气气氛为50℃的氮气气氛。