[发明专利]猪血浆及肺泡液内艾地普林和磺胺甲噁唑的定量检测方法

说明书

本发明公开了猪血浆及肺泡液内艾地普林和磺胺甲噁唑的定量检测方法，包括准备艾地普林和磺胺甲噁唑标准品溶液和待检测的样品提取液；线性回归分析，绘制标准曲线；分别用回收率和变异系数表示准确度和精密度；绘制工作曲线并计算出艾地普林和磺胺甲噁唑在猪血液和肺泡灌洗液中的回归方程和相关系数；实际样品测定和结果计算；本发明方法准确度高，精确度和灵敏度好，杂质较少，针对以往的HPLC法进行了改进，将梯度的时间以及条件进行了优化，增加了各峰之间的分离度，使得目标药物峰的灵敏度增高，提高了回收率。

技术领域

本发明涉及动物血液检测技术领域，具体涉及猪血浆及肺泡液内艾地普林和磺胺甲噁唑的定量检测方法。

背景技术

磺胺甲噁唑属于磺胺类抗生素，是一种广谱抗生素，早期研究对其敏感的病原菌有:链球菌、肺炎球菌、沙门氏菌、化脓放线菌、大肠杆菌、副禽嗜血杆菌、葡萄球菌、变形杆菌、巴氏杆菌、大肠杆菌、产气夹膜梭菌、炭疽杆菌等，对革兰氏阴性及阳性菌都有抑菌效果。磺胺甲噁唑的应用比较广泛，常与二甲氧苄啶联合应用。《中华人民共和国药典第二部》收录的兽用SMZ单方产品有磺胺甲恶唑片，复方制剂有与TMP组成的复方磺胺甲恶唑口服混悬液、复方磺胺甲恶唑片、小儿复方磺胺甲恶唑片。SMZ抗菌作用较强，为治疗全身感染的中效磺胺，主要用于治疗溶血性链球菌、脑膜炎球菌、肺炎球菌、巴氏杆菌等感染疾病，具有抗菌力强、药效持久、毒性小等；

但如今的研究报道表明，磺胺甲噁唑对上述细菌逐渐表现出普遍的耐药性，而磺胺类药物与磺胺增效剂联合使用，发现效果可以增强，降低了耐药性。艾地普林是一种新型的抗菌增效剂，药效学和药动学研究均表明其应用前景远远广于二甲氧苄啶。早期研究显示艾地普林与磺胺甲噁唑联用时对胸膜肺炎放线杆菌、猪巴氏杆菌的抗菌效力远高于ADP单用时的效力。因此研究开发新的复方制剂，不但能够减少单药的用量，弥补复方新诺明的不足之处，还可通过制定合理的给药方案，有效预防耐药性的产生，为兽医临床用药提供一个可供选择的药物，尤其是对艾地普林敏感菌如猪链球菌等感染引起的疾病；

动物源性细菌耐药性已是全球关注的重要问题，为加强兽用抗菌药的治疗水平、减少细菌耐药性，保障畜禽的健康安全和畜牧业的良好发展，建立和完善兽用抗菌药的给药方案至关重要。

目前关于艾地普林和磺胺甲噁唑的检测方法主要是液相色谱单药检测，其操作方案的费用较为昂贵，操作复杂，因此，本发明提出猪血浆及肺泡液内艾地普林和磺胺甲噁唑的定量检测方法，以解决现有技术中的不足之处。

发明内容

针对上述问题，本发明的目的在于提供猪血浆及肺泡液内艾地普林和磺胺甲噁唑的定量检测方法，该方法准确度高，精确度和灵敏度好，杂质较少，针对以往的HPLC法进行了改进，将梯度的时间以及条件进行了优化，增加了各峰之间的分离度，使得目标药物峰的灵敏度增高，提高了回收率。

为实现本发明的目的，本发明通过以下技术方案实现：

猪血浆及肺泡液内艾地普林和磺胺甲噁唑的定量检测方法，包括以下步骤：

步骤一：准备艾地普林和磺胺甲噁唑标准品溶液和待检测的样品提取液；

步骤二：绘制标准曲线，将3～5份不同浓度的艾地普林标准品溶液分别用于HPLC检测，然后进行洗脱处理，记录艾地普林标准品溶液色谱图和峰面积，进行线性回归分析，绘制得到标准曲线；

步骤三：分别用回收率和变异系数表示准确度和精密度，首先在空白猪血液中以及肺泡灌洗液中加入高、中、低三个浓度的艾地普林和磺胺甲噁唑，按照待检测的样品提取液的提取方法制备样品净化液供HPLC检测，同一天内每个浓度重复5次，然后取平均值，计算日内相对误差为日内变异系数，每个浓度重复5天，然后计算平均值和相对误差，得到日间变异系数，回收率采用如公式(1)所示的单点校准法进行计算：

X＝AV/ASW×100％ (1)