[发明专利]基于DNA步移和滚环扩增信号放大的电化学核酸检测方法有效
| 申请号： | 202010029620.3 | 申请日： | 2020-01-13 |
| 公开（公告）号： | CN111172246B | 公开（公告）日： | 2022-10-28 |
| 发明（设计）人： | 缪鹏;柴华 | 申请（专利权）人： | 天津国科医工科技发展有限公司;济南国科医工科技发展有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6851 | 分类号： | C12Q1/6851 |
| 代理公司： | 北京远大卓悦知识产权代理有限公司 11369 | 代理人： | 杨胜 |
| 地址： | 300399*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 基于 dna 扩增 信号 放大 电化学 核酸 检测 方法 | ||
1.一种用于非疾病诊断和治疗的核酸检测方法，用于对待测样品中的目标核酸进行定量检测，其特征在于，包括：
1）设计两个DNA四面体：DNA walker和DNA track；将该DNA walker和DNA track固定于电极表面；
2）在待测样品中加入padlock探针，随后将所述电极插入到待测样品中孵育；向待测样品中继续加入DNA连接酶和DNA聚合酶，于37℃下反应；
3）从待测样品中取出所述电极，将所述电极在室温下浸入Pb2+中反应，最后再与银纳米颗粒孵育；
4）将所述电极作为工作电极，使用电化学工作站，采用三电极系统记录线性伏安扫描曲线，通过检测伏安电流信号的变化，计算出目标核酸的浓度；
所述DNA track由探针A1、探针B、探针C和探针D四条序列组装而成；其中，
探针A1：NH2-AGTAAGGrATCACGGTTTTTTACATTCCTAAGTCTGAA ACATTACAGCTTGCTACACGAGAAGAGCCGCCATAGTA；
探针B：SH-TATCACCAGGCAGTTGACAGTGTAGCAAGCTGTAATAG ATGCGAGGGTCCAATAC；
探针C：SH-TCAACTGCCTGGTGATAAAACGACACTACGTGGGAATC TACTATGGCGGCTCTTC；
探针D：SH-TTCAGACTTAGGAATGTGCTTCCCACGTAGTGTCGTTT GTATTGGACCCTCGCAT；
所述DNA walker由探针A2、探针B、探针C和探针D四条序列组装而成；其中，
探针A2：ACATTCCTAAGTCTGAAACATTACAGCTTGCTACACGAGA AGAGCCGCCATAGTATTTAGTAAGAGGCTCAGTCAGTGTGGAAAATCTCTAGCGGCCGAGCCTCTTACT；
探针B：SH-TATCACCAGGCAGTTGACAGTGTAGCAAGCTGTAATAG ATGCGAGGGTCCAATAC；
探针C：SH-TCAACTGCCTGGTGATAAAACGACACTACGTGGGAATC TACTATGGCGGCTCTTC；
探针D：SH-TTCAGACTTAGGAATGTGCTTCCCACGTAGTGTCGTTT GTATTGGACCCTCGCAT；
所述padlock探针的序列为：GCTCGGCCAGCTTTCACGGAGTAAGAG。
2.根据权利要求1所述的核酸检测方法，其特征在于，所述目标核酸的序列为：GCTAGAGATTTTCCACACTGACT。
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