[发明专利]基于DNA步移和滚环扩增信号放大的电化学核酸检测方法

说明书

本案涉及一种基于DNA步移和滚环扩增信号放大的电化学核酸检测方法，包括设计两个DNA四面体：DNA walker和DNA track；将它们固定于电极表面；在待测样品中加入padlock探针，随后将电极插入到待测样品中孵育；向待测样品中继续加入DNA连接酶和DNA聚合酶反应；取出电极，在室温下浸入Pb²⁺中反应，最后与银纳米颗粒孵育；将电极作为工作电极，使用电化学工作站，采用三电极系统记录线性伏安扫描曲线，通过检测伏安电流信号的变化，计算出目标核酸的浓度。本案的检测方法灵敏度高，选择性高，操作简便，检测成本低。

技术领域

本发明涉及核酸检测领域，特别涉及一种基于DNA步移(DNA walking)和滚环扩增信号放大的电化学核酸检测方法。

背景技术

核酸是遗传信息的携带者和基因表达的物质基础，是生命科学和临床医学的研究重点。核酸检测技术已应用到基础研究、药物筛选、环境监测等多个领域。传统的核酸检测方法包括凝胶电泳、聚合酶链式反应(PCR)等，但在实际应用中仍存在一些不足。例如凝胶电泳染色的染料毒性大，PCR容易出现非特异扩增、假阳性高。近年来基于其他技术发展出一系列的核酸传感方法，包括荧光传感器、比色传感器、拉曼传感器等。但仍存在灵敏度不足，检测成本高，操作不便等问题。因此需要发展新型的操作简便、快速灵敏的核酸分析方法。

发明内容

针对现有技术中的不足之处，本发明提供了一种基于DNA步移和滚环扩增信号放大的电化学核酸检测方法。

本发明的技术方案如下：

一种核酸检测方法，用于对待测样品中的目标核酸进行定量检测，包括：

1)设计两个DNA四面体：DNA walker和DNA track；将该DNA walker和DNA track固定于电极表面；

2)在待测样品中加入padlock探针，随后将所述电极插入到待测样品中孵育；向待测样品中继续加入DNA连接酶和DNA聚合酶，于37℃下反应；

3)从待测样品中取出所述电极，将所述电极在室温下浸入Pb²⁺中反应，最后再与银纳米颗粒孵育；

4)将所述电极作为工作电极，使用电化学工作站，采用三电极系统记录线性伏安扫描曲线，通过检测伏安电流信号的变化，计算出目标核酸的浓度。

优选的是，所述的核酸检测方法，其中，所述目标核酸的序列为：GCTAGAGATTTTCCACACTGACT。

优选的是，所述的核酸检测方法，其中，所述DNA track由探针A1、探针B、探针C和探针D四条序列组装而成；其中，

探针A1：NH₂-AGTAAGGrATCACGGTTTTTTACATTCCTAAGTCTGAAACATTACAGCTTGCTACACGAGAAGAGCCGCCATAGTA；

探针B：SH-TATCACCAGGCAGTTGACAGTGTAGCAAGCTGTAATAGATGCGAGGGTCCAATAC；

探针C：SH-TCAACTGCCTGGTGATAAAACGACACTACGTGGGAATCTACTATGGCGGCTCTTC；

探针D：SH-TTCAGACTTAGGAATGTGCTTCCCACGTAGTGTCGTTTGTATTGGACCCTCGCAT。

优选的是，所述的核酸检测方法，其中，所述DNA walker由探针A2、探针B、探针C和探针D四条序列组装而成；其中，