[发明专利]一种酶法制备恩沙替尼中间体的方法

说明书

本发明涉及医药技术领域，公开了一种酶法制备恩沙替尼中间体的方法，以2,6‑二氯‑3‑氟苯基乙酮为底物，在羰基还原酶、辅因子及氢供体的存在下，发生不对称还原反应生成(R)‑2,6‑二氯‑3‑氟苯基乙醇，所述羰基还原酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明方法可以制备获得高手性ee值(ee＞99％)的恩沙替尼中间体(R)‑2,6‑二氯‑3‑氟苯基乙醇，以替代传统的化学合成方法，减少生产成本及对环境的污染。本发明提供的恩沙替尼中间体的合成方法，反应条件更温和，反应速度更快，反应收率和手性ee值高，且生产成本低，适合工业扩大化生产。

技术领域

本发明涉及医药技术领域，尤其涉及一种酶法制备恩沙替尼中间体的方法。

背景技术

恩沙替尼，是新一代间变性淋巴瘤激酶(ALK)抑制剂，商品名为贝美纳。临床结果显示恩沙替尼在疗效与进口药物相比更有优势，特别是颅内转移的患者中有更高的应答率，而且安全性方面更优。另外，研究进一步生物标志物分析显示，恩沙替尼具有针对广泛的继发性耐药突变的活性，包括对第二代ALK酪氨酸激酶抑制剂(TKI)出现耐药的突变，如C1156Y(ORR为71％)，F1174L/V(ORR为71％)、I1171T/S(ORR为50％)和G1202R(ORR为33％)。2例G1202R突变的患者经恩沙替尼治疗达到了部分缓解，持续缓解时间分别为7.6个月和4.0个月，研究提示恩沙替尼对G1202R点突变具有潜在的抑制作用。

恩沙替尼的结构式：

通过对恩沙替尼的结构分析可知，(R)-2,6-二氯-3-氟苯基乙醇是合成恩沙替尼的重要原料。因此，开发有效制备光学纯的(R)-2,6-二氯-3-氟苯基乙醇的方法具有重要的应用前景。目前，(R)-2,6-二氯-3-氟苯基乙醇主要以化学合成法合成为主，但该方法需要使用价格昂贵的手性配体和金属试剂，产品收率低，手性ee值不高，同时化学生产成本大且对环境不优化，不适于规模化生产。(S)-2,6-二氯-3-氟苯基乙醇的生物制备，目前已见报道，手性ee值大于99％，转化效率大于99％(US08852909)。但(R)-2,6-二氯-3-氟苯基乙醇的生物制备方法目前尚未见报道。因此，开发生物制备光学纯的(R)-2,6-二氯-3-氟苯基乙醇的方法具有重要意义。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供了一种酶法制备恩沙替尼中间体的方法。本发明利用羰基还原酶催化法制备高手性ee值(ee＞99％)的恩沙替尼中间体(R)-2,6-二氯-3-氟苯基乙醇，可以大幅减少生产成本及对环境的污染。

一种酶法制备恩沙替尼中间体的方法，其特征在于，所述方法以2,6-二氯-3-氟苯基乙酮为底物，在羰基还原酶、辅因子及氢供体的存在下，发生不对称还原反应生成(R)-2,6-二氯-3-氟苯基乙醇，所述羰基还原酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

SEQ ID NO.2：

MGILDNKVALVTGAGSGIGLAVAHSYAKEGAKVIVSDIDEDHGNKAVEDIKAQGGEASFVKADTSNPEEVEALVKRTVEIYGRLDIACNNAGIGGEAALAGDYGLDSWRKVLSINLDGVFYGCKYELEQMEKNGGGVIVNMASIAGIVAAPLRSAYTSAKHAVVGLTKNIGAEYGQKNIRCNAVGPAYIETPLLESLTKEAKEALISKHPMGRLGKPEEVAELVLFLSSEKSSFMTGGYYLVDGGYTAV*。

进一步地，所述羰基还原酶的DNA序列如SEQ NO.1所示。

SEQ ID NO.1：