[发明专利]固定化酶、其制备方法及应用

权利要求书

1.一种固定化酶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

采用聚乙二醇修饰交联剂，得到聚乙二醇修饰的交联剂；

将游离的酶共沉淀，同时加入所述聚乙二醇修饰的交联剂进行交联固定得到所述固定化酶。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述采用聚乙二醇修饰交联剂的步骤包括：交联剂与聚乙二醇混合，得到所述聚乙二醇修饰的交联剂；

优选的，所述聚乙二醇为PEG 2000～PEG 6000；

优选的，所述聚乙二醇与所以交联剂的质量比为1:5～5:1，更有选的，质量比为1:2～3:1；

优选的，所述交联剂为戊二醛或醛基化右旋糖苷

优选的，在室温下混合3～20小时。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述酶为ω-转氨酶、酮还原酶、环己酮单加氧酶、氨裂解酶、烯还原酶、亚胺还原酶、亮氨酸脱氢酶或腈水解酶。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述将游离的酶沉淀包括：

将沉淀剂滴加至含游离酶的溶液中，或将含游离酶的溶液滴加至沉淀剂中；

优选的，所述将游离酶沉淀操作包括将沉淀剂滴加至含游离酶的溶液中，或将含游离酶的溶液滴加至沉淀剂中搅拌。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述沉淀剂为选自由硫酸铵、乙醇、正丙醇、异丙醇、乙腈、PEG 2000-6000和丙酮组成的组中的一种或多种；其中，作为沉淀剂，硫酸铵的浓度为20～70g/100mL，优选为30～60g/100mL；乙醇的浓度为60～90g/100mL，优选为70～90g/100mL；正丙醇的浓度为50～90g/100mL，优选为60～80g/100mL；乙腈的浓度为50～90g/100mL，优选为60～70g/100mL；丙酮的浓度为50～90g/100mL，优选为60～80g/100mL；PEG 2000-6000的浓度为10～60g/100mL，优选为20～40g/100mL。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述聚乙二醇修饰的交联剂在酶沉淀和聚乙二醇修饰的交联剂进行交联的反应体系中的浓度为20mM～300mM，更优选为50～250mM；

优选的，所述反应体系的温度为2～30℃；

优选的，搅拌所述反应体系0.5～20h后抽滤，用缓冲液洗得到的固定化酶，优选的，所述缓冲液为磷酸盐缓冲液。

7.一种固定化酶，其特征在于，所述固定化酶通过如权利要求1至6中任一项所述的制备方法制备得到。

8.根据权利要求7所述的固定化酶，其特征在于，所述固定化酶为ω-转氨酶、酮还原酶、环己酮单加氧酶、氨裂解酶、烯还原酶、亚胺还原酶、亮氨酸脱氢酶或腈水解酶的固定化酶。