[发明专利]一种双功能纳米颗粒及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种双功能纳米颗粒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)将无水乙醇、水、氨水混合，然后搅拌均匀，得到混合物，接着往所述混合物中加入正硅酸乙酯，升温进行油浴加热处理，离心取沉淀，洗涤，干燥得到二氧化硅纳米颗粒；

(2)将步骤(1)所述二氧化硅纳米颗粒加入无水甲苯中，超声分散均匀，然后再加入硅烷偶联剂，搅拌反应，离心取沉淀，然后离心洗涤，得到改性后的二氧化硅纳米颗粒；

(3)将步骤(2)所述改性后的二氧化硅纳米颗粒加入N,N-二甲基甲酰胺中，超声分散均匀，然后再加入叠氮化钠，搅拌反应，离心取沉淀，然后洗涤，得到叠氮基团改性的二氧化硅纳米颗粒；

(4)将DBCO-PEG₄-NHS溶于二甲亚砜中，混合均匀，得到DBCO-PEG₄-NHS溶液；将Anti-CD47加入所述DBCO-PEG₄-NHS溶液中，混合均匀，然后进行孵育处理，超滤离心，取超滤管中的保留液，得到DBCO-PEG₄-CD47溶液；

(5)将钙网蛋白加入步骤(4)所述DBCO-PEG₄-NHS溶液中，混合均匀，进行孵育处理，超滤离心，取超滤管中的保留液，得到DBCO-PEG₄-CRT溶液；

(6)将步骤(3)所述叠氮基团改性的二氧化硅纳米颗粒加入水中，分散均匀，得到分散液，然后加入步骤(4)所述DBCO-PEG₄-CD47溶液和步骤(5)所述DBCO-PEG₄-CRT溶液，搅拌处理，得到混合液，离心取沉淀，洗涤，得到所述双功能纳米颗粒。

2.根据权利要求1所述的双功能纳米颗粒的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述无水乙醇与水的体积比为83：15-20；所述氨水的质量百分比浓度为25wt％-30wt％，所述氨水与水的体积比为5.6：1.5-2；所述正硅酸乙酯与水的体积比为5：1.5-2；所述油浴加热处理的温度为40℃，油浴加热处理的时间为10-24小时。

3.根据权利要求1所述的双功能纳米颗粒的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述无水甲苯与二氧化硅纳米颗粒的体积质量比为40-60mL：1g；所述硅烷偶联剂为3-氯丙基三甲氧基硅烷或3-溴丙基三甲氧基硅烷；所述硅烷偶联剂与二氧化硅纳米颗粒的体积质量比为1.3-1.6mL：1g。

4.根据权利要求1所述的双功能纳米颗粒的制备方法，其特征在于，步骤(3)所述N,N-二甲基甲酰胺与改性后的二氧化硅纳米颗粒的体积质量比为10-20mL：1g；所述叠氮化钠的质量为所述改性后的二氧化硅纳米颗粒质量的0.3-0.5倍。

5.根据权利要求1所述的双功能纳米颗粒的制备方法，其特征在于，步骤(4)所述DBCO-PEG₄-NHS购自click chemistry tools公司，货号为A134-100；所述DBCO-PEG₄-NHS溶液的浓度为5-15mg/mL；所述Anti-CD47与DBCO-PEG₄-NHS的摩尔比为1:20-1:50；所述超滤离心中使用的超滤管截留分子量为3K-100K。

6.根据权利要求1所述的双功能纳米颗粒的制备方法，其特征在于，步骤(5)所述钙网蛋白与步骤(4)所述DBCO-PEG₄-NHS的摩尔比为1:20-1:50；步骤(5)所述超滤离心中使用的超滤管截留分子量为3K-100K；步骤(6)所述叠氮基团改性的二氧化硅纳米颗粒与水的质量体积比为1:1-1:2mg/mL；步骤(6)所述DBCO-PEG₄-CD47溶液与DBCO-PEG₄-CRT溶液的体积比为1-3:1-3；步骤(6)所述DBCO-PEG₄-CD47溶液与水的体积比为0.5-1.5：10-20；步骤(6)所述DBCO-PEG₄-CD47溶液的浓度为30-40μg/mL；步骤(6)所述DBCO-PEG₄-CRT溶液的浓度为30-40μg/mL。