[发明专利]一种双功能纳米颗粒及其制备方法与应用

说明书

本发明公开一种双功能纳米颗粒及其制备方法与应用。该方法以叠氮基团改性的二氧化硅纳米颗粒为主体，通过“点击化学”反应在其表面修Anti‑CD47和钙网蛋白。本发明利用纳米颗粒多价态的优势，一方面，可特异性通过Anti‑CD47靶向肿瘤细胞表面的CD47受体，阻断CD47‑SIRPα信号通路恢复巨噬细胞对肿瘤细胞的吞噬能力；另一方面，在肿瘤细胞表面提供外源性的钙网蛋白，从而增强巨噬细胞对肿瘤细胞的吞噬，实现了在下调“Don’t eat me”信号的同时上调“Eat me”信号，从而显著增强巨噬细胞对肿瘤细胞的吞噬，调动机体的免疫响应，达到杀伤肿瘤的目的，因此可应用于与肿瘤免疫治疗相关药物的制备中。

技术领域

本发明属于生物材料技术领域，尤其涉及一种双功能纳米颗粒及其制备方法与应用。

背景技术

肿瘤的发病率和死亡率居高不下，已成为威胁人类健康的首要疾病。正常情况下，免疫系统可以识别并清除肿瘤微环境中的肿瘤细胞，但是在癌症患者中，肿瘤细胞可以通过多种途径逃避机体免疫系统的识别和清除，如诱导免疫抑制的肿瘤微环境，降低肿瘤细胞的免疫原性等。其中，肿瘤细胞逃避天然免疫系统如巨噬细胞等吞噬细胞清除的机制之一是上调细胞表面“别吃我”(don't eat me)信号的表达。整合素相关蛋白(CD47)便是一种重要的自我信号，它通过与巨噬细胞上的配体信号调节蛋白α(SIRPα)结合，进而抑制巨噬细胞对肿瘤细胞的吞噬；此外，在天然免疫细胞如树突状细胞等向适应性免疫T细胞提呈抗原的过程中，CD47也发挥着抑制作用。因此，CD47在肿瘤免疫中发挥着重要的调节作用，靶向CD47是一个潜在的抗肿瘤方向。

目前，在临床研究中已测试了多种基于CD47单克隆抗体的CD47抑制剂，并证明了其具有抗肿瘤的潜力，CD47阻断也被证明可以改善免疫检查点抑制剂疗法和放射治疗的疗效。然而,由于CD47表达广泛，在正常细胞如红细胞、血小板、白细胞等血细胞上均表达，使用CD47抗体会结合正常红细胞，引起严重的副作用，例如贫血和血小板减少症等。此外也有研究表明(Jonathan T.Sockolosky,Michael Dougan,Jessica R.Ingram et al.Durableantitumor responses to CD47 blockade requireadaptive immune stimulation.PNSA,2016:2646-2654.)，CD47抗体需在细胞表面有钙网蛋白提供的“吃我”(eat me)信号存在的情况下才能发挥最优的促吞噬作用，这些不足在一定程度上限制了CD47抗体在肿瘤治疗中的应用。因此，如何提高CD47抗体对肿瘤细胞的特异性靶向能力，阻断CD47-SIRPα抑制通路，恢复免疫细胞对肿瘤细胞的杀伤是目前优化CD47抑制剂的使用需要克服的关键问题。

发明内容

为了克服现有技术存在的上述不足，本发明的目的是提供一种双功能纳米颗粒及其制备方法与应用。

本发明的首要目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种双功能纳米颗粒的制备方法与应用。本发明提供的制备方法，其以叠氮基团改性的二氧化硅纳米颗粒为主体，通过“点击化学”反应在其表面修饰Anti-CD47和钙网蛋白，利用纳米颗粒多价态的优势，提高了抗CD47抗体对肿瘤细胞的特异性靶向能力，实现了在下调“Don’t eat me”信号的同时上调“Eat me”信号，从而恢复并增强了免疫细胞对肿瘤细胞的杀伤，调动机体的免疫反应，达到杀伤肿瘤的目的，因此可应用于与肿瘤免疫治疗相关药物的制备中。

本发明的目的至少通过如下技术方案之一实现。