[发明专利]一种基于光子晶体的外泌体多元检测方法有效
申请号: | 202010039641.3 | 申请日: | 2020-01-14 |
公开(公告)号: | CN111157504B | 公开(公告)日: | 2022-06-14 |
发明(设计)人: | 陈宝安;马晓燕;栾成欣;吴雪;周芳;张静 | 申请(专利权)人: | 东南大学 |
主分类号: | G01N21/64 | 分类号: | G01N21/64 |
代理公司: | 南京苏高专利商标事务所(普通合伙) 32204 | 代理人: | 冒艳 |
地址: | 211102 江*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 基于 光子 晶体 外泌体 多元 检测 方法 | ||
1.一种基于光子晶体的外泌体多元检测方法,其特征在于:首先在活化后的核壳式光子晶体材料表面修饰不同的肿瘤特异性适配体,实现对不同肿瘤来源的外泌体亚群多元检测,与外泌体溶液共同孵育后,利用CD63适配体进行双重识别及杂交核酸链式反应得到放大的荧光;
所述CD63适配体有一段能够触发杂交链式反应的序列,所述序列为SEQ ID NO.1:
5’-caccccacctcgctcccgtgacactaatgctat ttt ttt aaccctaaccct-3’;
所述的双重识别一是指肿瘤特异性适配体特异性识别肿瘤来源外泌体表面的特异性蛋白包括Epcam适配体、PSMA适配体、MUC-1适配体或AS1411适配体,一是CD63适配体识别外泌体的四跨膜蛋白之一的cd63。
2.根据权利要求1所述的基于光子晶体的外泌体多元检测方法,其特征在于:所述核壳式光子晶体材料的制备方法,包括如下步骤:
(1)制备光子晶体微球模板:单分散的胶体晶体纳米粒子加去离子水稀释形成胶体溶液,用微流控装置剪切成单分散的液滴,固化液滴模板,清洗,煅烧之后,即可;
(2)制备核壳式光子晶体水凝胶微球:将光子晶体微球投入水凝胶聚合前体溶液中,固化后将水凝胶浸泡在去离子水中,根据微球内外不同的膨胀程度从水凝胶中剥离光子晶体微球,通过腐蚀得到核壳式光子晶体材料。
3.根据权利要求2所述的基于光子晶体的外泌体多元检测方法,其特征在于:所述步骤(1)中胶体晶体纳米粒子为二氧化硅胶体粒子、二氧化钛胶体粒子或聚苯乙烯类聚合物溶液。
4.根据权利要求2所述的基于光子晶体的外泌体多元检测方法,其特征在于:所述步骤(2)中水凝胶聚合前体溶液为聚乙二醇双丙烯酸酯、甲基丙烯酸酯明胶或丙烯酸中的一种或几种的混合。
5.根据权利要求2所述的基于光子晶体的外泌体多元检测方法,其特征在于:所述步骤(2)中腐蚀所用的腐蚀剂是氢氟酸或氢氧化钠。
6.根据权利要求1所述的基于光子晶体的外泌体多元检测方法,其特征在于:所述杂交核酸链式反应所用的两段序列为SEQ ID NO.2:5’-actttgaaccctagggttagggtt-3’;SEQID NO.3:5’-agggttcaaagtaaccctaaccct-3’,两段序列均为FAM荧光修饰。
7.根据权利要求1所述的基于光子晶体的外泌体多元检测方法,其特征在于:所述用MES/EDC/NHS活化系统进行活化。
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