[发明专利]一种基于光子晶体的外泌体多元检测方法有效
申请号: | 202010039641.3 | 申请日: | 2020-01-14 |
公开(公告)号: | CN111157504B | 公开(公告)日: | 2022-06-14 |
发明(设计)人: | 陈宝安;马晓燕;栾成欣;吴雪;周芳;张静 | 申请(专利权)人: | 东南大学 |
主分类号: | G01N21/64 | 分类号: | G01N21/64 |
代理公司: | 南京苏高专利商标事务所(普通合伙) 32204 | 代理人: | 冒艳 |
地址: | 211102 江*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 基于 光子 晶体 外泌体 多元 检测 方法 | ||
本发明公开了一种基于光子晶体的外泌体多元检测方法,基于核壳式光子晶体材料,通过在其表面修饰不同的肿瘤特异性适配体,实现对不同肿瘤来源的外泌体亚群多元检测,最终通过CD63适配体的双重识别及杂交链式反应得到放大的荧光,进而对外泌体进行检测。该方法具有稳定性好、准确、高效、节省时间、避免重复劳动等优点。
技术领域
本发明涉及外泌体的检测方法,特别涉及一种基于光子晶体的外泌体多元检测方法。
背景技术
外泌体是细胞分泌的一类膜性囊泡,大小在30-150nm之间,可由体内多种细胞分泌并稳定存在于在体液循环中。外泌体外部有磷脂双分子层保护,内部携带由来自亲本细胞的多种生物大分子,包括蛋白质、脂质和核酸分子等,携带由亲本细胞的大量信息,是细胞间通讯的重要运载体。研究证明外泌体在促进肿瘤生长与转移过程中起重要作用,在肿瘤诊断和治疗领域研究价值巨大。尤其在临床诊断领域,表达肿瘤特异性标志物的肿瘤来源外泌体亚群作为肿瘤液体活检生物标志物具有广泛应用前景。目前外泌体检测方法多耗时耗力,多依赖于昂贵的仪器,难以实现同时对多种外泌体亚群进行检测。
光子晶体是一种特殊的纳米材料,周期性的纳米结构赋予它稳定的反射峰及结构色。其中以功能性水凝胶构建的核壳式结构因其编码稳定、及较大的比表面积、易修饰等优点,在生物检测分析方面逐渐显现出巨大的潜力。适配体是一小段经体外筛选得到的寡核苷酸序列,能与相应的配体进行高亲和力和强特异性的结合,相较于基于抗体的免疫检测方法,适配体作为一种新型的分子识别元件,具有更多的优势:亲和力高、特异性强、制备方便、稳定性好。结合上述两者的优点,我们构建出一种外泌体多元检测的新方法。
发明内容
发明目的:本发明目的是提供基于光子晶体的外泌体多元检测方法。
技术方案:本发明提供一种基于光子晶体的外泌体多元检测方法,首先在活化后的核壳式光子晶体材料表面修饰不同的肿瘤特异性适配体,实现对不同肿瘤来源的外泌体亚群多元检测,与外泌体溶液共同孵育后,利用CD63适配体进行双重识别及杂交核酸链式反应得到放大的荧光。所述的双重识别一是指肿瘤特异性适配体特异性识别肿瘤来源外泌体表面的特异性蛋白比如epcam,一是CD63适配体识别外泌体的四跨膜蛋白之一的cd63。
进一步地,所述核壳式光子晶体材料的制备方法,包括如下步骤:
(1)制备光子晶体微球模板:单分散的胶体晶体纳米粒子加去离子水稀释形成胶体溶液,用微流控装置剪切成单分散的液滴,固化液滴模板,清洗,煅烧之后,即可;
(2)制备核壳式光子晶体水凝胶微球:将光子晶体微球投入水凝胶聚合前体溶液中,固化后将水凝胶浸泡在去离子水中,根据微球内外不同的膨胀程度从水凝胶中剥离光子晶体微球,通过腐蚀得到核壳式光子晶体材料。
进一步地,所述步骤(1)中胶体晶体纳米粒子为二氧化硅胶体粒子、二氧化钛胶体粒子或聚苯乙烯类聚合物溶液。
进一步地,所述步骤(2)中水凝胶聚合前体溶液为聚乙二醇双丙烯酸酯、甲基丙烯酸酯明胶或丙烯酸中的一种或几种的混合。
进一步地,所述步骤(2)中腐蚀所用的腐蚀剂是氢氟酸或氢氧化钠。
进一步地,所述肿瘤特异性适配体为Epcam适配体、PSMA适配体、MUC-1适配体或AS1411适配体。
进一步地,所述CD63适配体有一段能够触发杂交链式反应的序列,所述序列为SEQID NO.1:
5’-caccccacctcgctcccgtgacactaatgctat ttt ttt aaccctaaccct-3’。
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