[发明专利]一种靶向巨细胞病毒抗原的特异性T细胞受体及其应用

说明书

本申请公开了一种靶向巨细胞病毒抗原的特异性T细胞受体及其应用。本申请靶向巨细胞病毒抗原的特异性T细胞受体，能够特异性的靶向结合巨细胞病毒磷蛋白pp65，特异性T细胞受体的α链和β链各具有三个互补决定区，α链的三个互补决定区依序为SEQ ID No.4、5、2所示序列；β链的三个互补决定区依序为SEQ ID No.6、7、3所示序列。本申请的特异性T细胞受体，能够特异性的靶向结合巨细胞病毒磷蛋白pp65的抗原表位多肽，为巨细胞病毒相关疾病的TCR‑T治疗提供了一种新的方案；并且，本申请的特异性T细胞受体制备方法简单易操作，为基于特异性T细胞受体的TCR‑T治疗的推广应用奠定了基础。

技术领域

本申请涉及巨细胞病毒领域，特别是涉及一种靶向巨细胞病毒抗原的特异性T细胞受体及其应用。

背景技术

巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)属于疱疹病毒家族中的一员。巨细胞病毒感染后症状差别较大，可以无任何症状，也可以出现周身不适和发热，免疫力低下者及胎儿可出现严重的症状，如失明、脑及内脏受损。该病毒可通过性或非性的体液传播。同时，CMV感染也常见于器官移植、骨髓移植，是一个引起同种异体的造血干细胞移植(allo-HSCT)后的疾病与死亡的重要因素。然而，当前由于抗病毒药物，例如acyclovir,valganciclovir,ganciclovir，常常引起严重的副作用，并且随着耐药病毒株的发展，这种抗病毒药物的治疗手段往往是无效的。

通常，免疫效应机制会抑制大量的病毒复制和传播。然而，因同种异体干细胞移植(allo-HSCT)引起的免疫受损，会使潜伏的人巨细胞病毒再激活，从而导致严重的临床并发症。近年来，研究者通过体外培养富集的CMV特异性T细胞克隆和T细胞系，过继移植携带CMV阳性的干细胞移植患者，可有效的恢复病毒特异性T细胞反应，潜在降低移植物抗宿主(GVHD)的风险。然而，由于CMV特异性T细胞体外扩增的复杂技术限制以及过高的成本需求严重阻碍了其应用。此外，由于CMV阴性供体的移植患者的特异性T重建十分困难，并且缺乏过继治疗，这些供体不能获得CMV特异性的T细胞，因此依旧存在较高的风险。在同种异体的造血干细胞移植后，患者的血液中尚未实现针对CMV的高亲和力T细胞应答，也就是其免疫系统无法针对CMV感染进行保护。携带CMV高亲和力的TCR基因的慢病毒改造后的T细胞受体工程化T细胞(TCR-T)疗法，能够有效的控制急性CMV疾病，引起抗病毒免疫应答。该疗法有希望成为CMV感染最有效的疗法之一。

尽管TCR-T对于治疗CMV感染引起的疾病很有希望，但如何从病人体内或者体外刺激的细胞毒T淋巴细胞中获得有效的T细胞，快速的获得其TCR序列，从而构建有功能的TCR转导的特异性T细胞，成为TCR-T未来应用的巨大挑战。以往的研究通过5’Race，多重PCR等多种方法进行TCR序列鉴定。然而其筛选流程复杂，且缺失TCR配对信息，成为其广泛应用的阻力。随着单细胞测序技术的发展，目前已经可以在单细胞水平实现高通量的TCR配对序列的测定，以及免疫细胞重要基因表达水平评估。

发明内容

本申请的目的是提供一种新的靶向巨细胞病毒抗原的特异性T细胞受体及其应用。

本申请具体采用了以下技术方案：

本申请的第一方面公开了一种靶向巨细胞病毒抗原的特异性T细胞受体，该特异性T细胞受体能够特异性的靶向结合巨细胞病毒磷蛋白pp65；该特异性T细胞受体的α链和β链各具有三个互补决定区，其中，α链的三个互补决定区依序为SEQ ID No.4、SEQ ID No.5、SEQ ID No.2所示序列；β链的三个互补决定区依序为SEQ ID No.6、SEQ ID No.7、SEQ IDNo.3所示序列；

SEQ ID No.2：CARNTGNQFYF

SEQ ID No.3：CASSYVTGTGSYGYTF

SEQ ID No.4：SSNFYA

SEQ ID No.5：MTLNGD