[发明专利]一种用于葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）基因突变检测的引物序列及试剂盒

说明书

本发明公开了一种用于检测葡萄糖‑6‑磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏症相关致病突变的引物序列及试剂盒。试剂盒包括5对扩增引物，能特异地扩增G6PD缺乏症相关G6PD基因16个常见突变位点区域；16条单碱基延伸引物，用于检测G6PD基因16个突变位点基因型；另外包括预处理及检测专用试剂。本发明所述试剂盒可实现1孔检测临床G6PD缺乏症致病相关常见16种突变，灵敏度高、特异性强、准确性高，并且操作简便、低成本、高通量，检测快速，结果自动判读，易于临床推广应用。本发明可应用于产前诊断或新生儿遗传病筛查检测，为G6PD缺乏症携带者或患者的快速检测提供一种可靠的检测试剂。

技术领域

本发明属于分子诊断技术领域，具体涉及一种基于基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF)平台的用于葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)基因突变检测的引物序列及试剂盒。

背景技术

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症(glucose-6-phosphate dehydrogenasedeficiency,G6PDd)是因调控葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(glucose-6-phosphatedehydrogenase,G6PD)基因突变导致其G6PD活性降低所致，属伴X连锁不完全显性遗传病。其发病常由误食蚕豆而诱发，故又称“蚕豆病”。患者在感染、氧化应激、食物或药物诱发等情况下，可发生急性溶血性贫血、高胆红素血症，严重者可致核黄疸，甚至危及生命。本病重在预防，通过新生儿疾病筛查及时发现G6PDd患者。避免接触食物、药物等诱发因素，是对该病进行预防的主要措施。全世界约2亿人罹患此病，中国是本病的高发区之一，在海南、广东、广西、云南、贵州、四川等我国南方地区高发,呈南高北低的分布特点，且男性发病率高于女性，患病率为0.2-44.8％。

G6PDd的致病原因是G6PD基因突变，G6PD基因位于Xq28，长约20kb，包含13个外显子，编码515个氨基酸的蛋白酶，起始密码子位于第2外显子，第1外显子不参与翻译。目前已报道的致病性突变有214种。而不同的基因突变类型，可以导致G6PD结构不一样，酶活性有差异，即使G6PD基因没有功能缺失，也有可能存在不同程度缺乏。

G6PDd男性多于女性，因为男性只有一条X染色体,一旦这唯一的染色体G6PD基因功能缺失,则表现为G6PD重度缺乏；女性有两条X染色体,如果仅有1条X染色体G6PD基因功能缺失,则为杂合子,表现为中度缺乏,两条X染色体均缺失G6PD基因才表现为重度缺乏。

将G6PD缺乏症的致病性变异分为I-IV类：I类致病性变异导致酶活性严重缺乏，伴先天性非球形细胞溶血性贫血，主要位于外显子6、10和13，这些致病性变异所编码的氨基酸多位于底物结合区、NADP+辅酶结合区等重要结构域；II类致病性变异导致酶活性严重缺乏；III类致病性变异导致酶活性轻中度缺乏；IV类致病性变异导致酶活性轻度降低或正常(主要为外显子5和9的致病性变异)。大部分导致G6PD缺乏症的致病性变异属于I、II、III类，极少数为IV类。

G6PD缺乏症的临床表现与一般溶血性贫血大致相同。分新生儿黄疸、蚕豆病、药物性溶血、感染性溶血、非球形细胞溶血性贫血等临床类型。多数患者症状较轻，特别是女性杂合子，平时不发病，无自觉症状，部分患者可表现为慢性溶血性贫血症状。常因食用蚕豆、服用或接触某些药物、感染等诱发血红蛋白尿、黄疸、贫血等急性溶血反应。但少数患者因G6PD缺乏诱发的严重的急性溶血性贫血。因红细胞破坏过多，如不及时处理，可引起肝、肾、或心功能衰竭，甚至死亡。G6PD缺乏症是新生儿病理性黄疸的主要原因,患G6PD缺乏症的新生儿中，约50％的患儿会出现新生儿黄疸，其中约12％可发展为核黄疸，导致脑部损害，引起智力低下。

G6PDd的及早诊断和预防是我国优生优育工作的一个重要组成部分。因此，我国多个省份已开始对育龄夫妇G6PD进行筛查，并将G6PDd列入新生儿疾病筛查常规项目。