[发明专利]一种黑虎耳草中岩白菜素化学对照品的分离制备方法

说明书

本发明涉及天然药物化学技术领域，具体涉及一种黑虎耳草中岩白菜素化学对照品的分离制备方法。其制备方法：提取、聚酰胺柱富集及微孔树脂柱分离三个步骤。本发明成本低廉、产品纯度大于98%；本发明采用的技术手段可进行规模化生产：原料要求不高、成本低廉，易于批量备料；甲醇室温冷浸提取，易于操作；采用聚酰胺柱富集，该分离材料可以装于中压柱系统并接在制备液相色谱上，易于规模化；分离中使用的微孔树脂柱，为快速的等度方法。

技术领域

本发明涉及天然药物化学技术领域，具体涉及一种黑虎耳草中岩白菜素化学对照品的分离制备方法。

背景技术

黑虎耳草（Saxifraga atrata）系属虎耳草属（Saxifraga L.）、虎耳草科（Saxifragaceae）植物。现代研究表明虎耳草属植物中的化学成分主要包括酚类及黄酮类。现代药理学的研究表明，虎耳草属植物（包含黑虎耳草）具有多方面的药理作用，如具有清热、解毒、消炎、清肝、胆热证，可治疗风疹、湿疹、中耳炎、丹毒、咳嗽吐血、痔疾等疾病。为了加快黑虎耳草的种质资源评价和相关新药的研发步伐，发展高纯度化学对照品的高效制备方法，尤其规模化制备技术显得尤为重要。

目前，有关从黑虎耳草中规模化快速制备化合物岩白菜素的文献报道并未见，已有的研究也未做到系统化的研究。因此，亟需建立一种工艺简单、规模化从从黑虎耳草中规模化快速制备化合物岩白菜素的方法。

发明内容

基于上述问题，本发明的目的在于提供一种黑虎耳草中岩白菜素化学对照品的分离制备方法。

一种黑虎耳草中岩白菜素化学对照品的分离制备方法，该方法具体包括如下步骤：

步骤1，提取：将黑虎耳草阴干，粉碎后加入其质量10倍的甲醇，在室温下提取3次，每次2~4 h，过滤、合并滤液，即滤液A，该滤液A按聚酰胺的量：黑虎耳草药材的量=1:5~15拌样并减压干燥，即得黑虎耳草甲醇提取物拌样样品；

步骤2，聚酰胺柱富集：所述黑虎耳草甲醇提取物拌样样品，该样品经装有聚酰胺材料的中压色谱塔分离，经检测波长为254 nm的紫外检测器检测，收集制备色谱图中第一个主要的色谱峰馏分，该馏分经减压干燥即得含有目标成分的组分；

步骤3，微孔树脂柱分离：所述含有目标成分的组分用体积分数为30~80%的甲醇-水溶液溶解，配制样品浓度为20.0~40.0 mg/mL，经0.45 μm微孔滤膜过滤，得到滤液，即滤液B，该滤液B经微孔树脂柱分离，经检测波长为254 nm的紫外检测器检测，收集制备色谱图中主要的色谱峰馏分，该色谱峰馏分经减压干燥得到纯度大于99%的岩白菜素化学对照品。

进一步的，所述步骤1、步骤2和步骤3中，减压干燥的条件均为：真空度50~250mbar，温度40~60℃。

进一步的，所述步骤2中，聚酰胺分离的工作参数为色谱柱柱长460 mm、直径15~49mm，流动相A为水，B为乙腈，色谱分离条件为：0~60min，0~50%B，进样量为16~40g，流速为10~110 mL/min。

进一步的，所述步骤3中，微孔树脂柱分离的工作参数是指色谱柱柱长460 mm、直径15~49 mm，微孔树脂柱固定相为HP20SS或CHP20P，流动相为体积分数2~10%的乙腈-水溶液，进样体积为2~10 mL，流速为10~110 mL/min。

本发明与现有技术相比具有以下优点：

（1）本发明成本低廉、产品纯度高

使用的提取溶剂，聚酰胺富集使用的溶剂、微孔树脂分离溶剂均可以回收利用；使用的色谱分离材料（聚酰胺和微孔树脂）均可以重复利用，回收利用的溶剂和重复利用的分离材料保证了分离过程中平均成本比较低廉，两步中压分离（聚酰胺柱富集和微孔树脂柱分离）可以保证产品的纯度大于98%。