[发明专利]一种冬生疫霉的特异性检测新靶标Phibe_s00003g00002.1及其应用有效
| 申请号： | 202010041623.9 | 申请日： | 2020-01-15 |
| 公开（公告）号： | CN111118038B | 公开（公告）日： | 2020-10-30 |
| 发明（设计）人： | 戴婷婷;胡涛;汪澳华;焦彬彬;严娟;廖婷婷;陈贞鹏 | 申请（专利权）人： | 南京林业大学 |
| 主分类号： | C12N15/31 | 分类号： | C12N15/31;C07K14/37;C12Q1/6895;C12Q1/6844;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/645 |
| 代理公司： | 北京轻创知识产权代理有限公司 11212 | 代理人： | 王佳妹 |
| 地址： | 210037 *** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 冬生疫霉 特异性 检测 靶标 phibe_s00003g00002 及其 应用 | ||
1.一种冬生疫霉(Phytophthora hibernalis)的特异性新检测靶标Phibe_s00003g00002.1，其特征在于，其DNA序列如SEQ ID NO：1所示。
2.一种冬生疫霉(Phytophthora hibernalis)的特异性检测新靶标Phibe_s00003g00002.1，其特征在于，其编码的蛋白序列如SEQ ID NO：2所示。
3.权利要求1或2所述的检测靶标Phibe_s00003g00002.1在检测冬生疫霉(Phytophthora hibernalis)中的应用。
4.权利要求1所述的冬生疫霉(Phytophthora hibernalis)的特异性检测新靶标Phibe_s00003g00002.1的RPA检测引物及探针组合，其特征在于，所述检测引物中，正向引物序列如SEQ ID NO：3所示，反向引物序列如SEQ ID NO：4所示，所述探针序列如SEQ IDNO：5所示。
5.权利要求4所述的检测引物和探针组合在检测冬生疫霉(Phytophthorahibernalis)中的应用。
6.一种检测冬生疫霉(Phytophthora hibernalis)的试剂盒，其特征在于，至少包括1次用量以上的权利要求4所述的检测引物和探针组合。
7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括：装有冻干酶粉的Twist Amp反应单元管、缓冲液Buffer、MgAc、去离子水、HybriDetect assay buffer、侧流层析试纸条。
8.权利要求7所述的试剂盒在检测冬生疫霉(Phytophthora hibernalis)中的应用。
9.一种检测冬生疫霉(Phytophthora hibernalis)的方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)提取待测样本DNA；
2)以DNA为模板，利用权利要求4所述的引物和探针组合或权利要求6所述的检测冬生疫霉(Phytophthora hibernalis)的试剂盒进行RPA扩增；
3)应用侧流层析试纸条进行RPA扩增产物检测；当试纸条出现两条棕色条带，一条位于质控区内，一条位于检测区，则结果为阳性，表明样本中含有冬生疫霉(Phytophthorahibernalis)；当试纸条只有质控区出现一条棕色条带，检测区没有条带，则结果是阴性，表明样本中不含有冬生疫霉(Phytophthora hibernalis)。
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