[发明专利]一种分子检测SARS-CoV-2冠状病毒的一步法试剂盒

说明书

本发明公开了一种分子检测SARS‑CoV‑2冠状病毒的一步法试剂盒，所述试剂盒包括1）2X RT‑qPCR mix；2）上游引物detF；3）下游引物detR；4）探针probe；5）阳性质控品；6)阴性质控品。本发明设计的引物、探针、搭配市售的一步法RT‑qPCR试剂，做出的SARS‑CoV‑2冠状病毒检测试剂盒，抗人类核酸的干扰能力强。本发明操作简单，耗时短，检测特异性好，灵敏度高，稳定性好，抗来自病毒宿主核酸干扰的能力强，可广泛应用于SARS‑CoV‑2冠状病毒的早期筛查，口岸检验检疫，疫情控制和科学研究等多个领域。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种分子检测SARS-CoV-2冠状病毒的一步法试剂盒。

背景技术

SARS-CoV-2冠状病毒的全基因组序列，如本发明所附序列表所示。

SARS-CoV-2冠状病毒，是一种全新的病毒，此前尚未有报道，也无有效的检测方法。该病毒基因组的核酸是RNA，若想对其进行分子基因检测，必须检测RNA。

发明内容

本发明的目的在于提供一种分子检测SARS-CoV-2冠状病毒的一步法试剂盒。

为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

通过序列分析，发现SARS-CoV-2冠状病毒的基因组序列的21712bp-23090bp这一区间，共计1379bp，与目前已知的任何序列，同源性差，具有作为分子检测靶标的潜力。

通过进一步的序列分析，上述区间中的21712bp-22461bp，共计750bp，与目前已知的任何序列都没有相似性，是理想的作为分子检测的靶标区域。

本发明，采用一步法逆转录并实时荧光定量PCR的方式，对上述750bp的靶标区域，进行分子检测，设计引物和探针。一步法逆转录并实时荧光定量PCR的核心引物和探针序列如下：

上游引物detF：

5‘TCCTGGTGATTCTTCTTCAGGT 3’；

下游引物detR：

5‘TCCTAGGTTGAAGATAACCCACA 3’；

探针probe：

5‘AGCTGCAGCACCAGCTGTCCA 3’(探针的5’端做荧光基团修饰(比如FAM)，3’端做猝灭基团修饰(比如BHQ1))，需要进一步说明的是，荧光和猝灭基团也可以做其它类型的类似修饰。

本发明还提供一种分子检测SARS-CoV-2冠状病毒的试剂盒，其包括

1)2X RT-qPCR mix；

2)上游引物detF；

3)下游引物detR；

4)探针probe；

5)阳性质控品；

6)阴性质控品。

进一步的，所述阳性质控品为人工合成的含有SARS-CoV-2病毒的RNA，并由来自于人类293T细胞的total RNA稀释；所述阴性质控品为来自于人类293T细胞的total RNA。

进一步的，所述上游引物的母液浓度为10μM，工作浓度为0.2μM，所述下游引物的母液浓度为10μM，工作浓度为0.2μM；所述探针的母液浓度为10μM，工作浓度为0.2μM。