[发明专利]快速鉴别罗氏沼虾性别的方法

说明书

本发明适用于水产养殖技术领域，具体涉及一种快速鉴别罗氏沼虾性别的方法，该方法包括：从罗氏沼虾组织中提取罗氏沼虾基因组DNA；设计引物并进行PCR扩增，该引物对为SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4或者与SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4同源性80％以上的序列；将PCR扩增后得到的产物进行电泳分离，根据带型判定所检测罗氏沼虾的遗传性别。该方法能够通过一次PCR，采用一种引物对，快速区分三种不同基因型(ZZ、ZW和WW)的罗氏沼虾，可以用来鉴别产生单性苗种的亲虾及虾苗的性别，具有重大应用价值。

技术领域

本发明属于水产养殖技术领域，具体涉及一种快速鉴别罗氏沼虾性别的方法。

背景技术

罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)属于节肢动物门，生长在淡水或咸淡水中，分布于印度洋、太平洋热带及亚热带地区。其个体大，食性广，肉质鲜嫩，营养价值高，是世界上养殖价值较高的虾类品种之一。

罗氏沼虾的养殖过程存在以下特点：1.雌雄虾生长差异大，雄虾的生长速度比雌虾快50％以上；2.将罗氏沼虾雌雄混养，性成熟开始交配消耗能量影响生长；3.在养殖过程中，罗氏沼虾雌雄混养，雄性领域性更强，残杀严重；4.雌虾攻击行为弱，适合高密度养殖。因此，改变罗氏沼虾雌雄混养的格局，推广单性养殖模式，可以显著提高养殖的经济效益。

罗氏沼虾属于ZW或ZZ型，其中ZW发育为雌性个体，而ZZ发育为雄性个体。甲壳类动物所特有的内分泌腺—促雄性腺(androgenic gland)对其性别分化有举足轻重的作用。通过调控性别分化过程中促雄性腺激素基因的表达，可以得到假雄虾(遗传性别为ZW，但生理表现为雄性)、假雌虾(遗传性别为ZZ，但生理表现为雌性)和超雌性(遗传性别为WW，生理表现为雌性)。利用这些人工干预促雄性腺激素基因得到的虾，可进一步交配产生全雄或全雌单性虾苗(参见中国专利申请CN107406825A,CN101981046B)。如何快速、正确区分罗氏沼虾的遗传性别，对亲虾及虾苗进行性别鉴定，是产生单性苗种的重要步骤。

现有技术通过分析罗氏沼虾基因组的扩增长度多态性(amplified fragmentlength polymorphism)，获得了罗氏沼虾雌性特异扩增片段(Jiang et al.,2013)，建立了罗氏沼虾雌性性别特异扩增的方法(CN 102719531 A)。然而，由于缺乏雄性特异基因组片段，该方法存在一定的局限性：1.不能区分ZW和WW基因型；2.出现假阳性(如PCR污染)或假阴性(基因组质量问题或PCR扩增出现问题)时难以准确判断性别。

随着罗氏沼虾向单性养殖模式的转变，研发一种同时区分不同基因型(即ZW，ZZ和WW)的方法尤为重要。

参考文献：

Jiang XH,Qiu GF.Female-only sex-linked amplified fragment lengthpolymorphism markers support ZW/ZZ sex determination in the giant freshwaterprawn Macrobrachium rosenbergii.Anim Genet，201344:782-785.

发明内容

为解决以上问题，本申请的发明人通过较低的退火温度进行罗氏沼虾基因组的扩增长度多态性扩增(Jiang et al.,2013)，得到了罗氏沼虾雌雄性别的基因组特异片段(见附图1)。在此基础上，本发明首次建立了快速区分罗氏沼虾三种不同基因型的方法。

本发明提供了一种快速鉴别罗氏沼虾性别的方法，该方法能够快速对罗氏沼虾ZZ、ZW和WW基因型进行区分，解决了罗氏沼虾遗传性别鉴定问题，为罗氏沼虾性控育种奠定了良好的基础。

发明采用以下技术方案解决了上述技术问题：

一种快速鉴别罗氏沼虾性别的方法，包括以下步骤：