[发明专利]副溶血弧菌的核酸快速恒温检测方法及应用

权利要求书

1.一种针对副溶血弧菌的快速恒温检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)从待测样品中提取基因组DNA；

(2)以所述基因组DNA为模板，以能扩增副溶血弧菌基因组特异性碱基序列的引物组作为引物，在酶反应体系下进行恒温扩增反应；

(3)通过判断反应结果是否为阳性，确定待测样品中是否存在副溶血弧菌；

其中，所述副溶血弧菌基因组特异性碱基序列为GI号为28899855的副溶血弧菌基因组的22268～23012bp位序列；

其中，所述能扩增副溶血弧菌基因组特异性碱基序列的引物组选自以下引物组C、D、D’之任意一组；

引物组C：

上游外引物F3_C：5’-TCTTGAGTAGCGGTTCAA-3’(SEQ ID NO：9)；

下游外引物B3_C：5’-GGAAGTCTCTATGAATCTAACC-3’(SEQ ID NO：10)；

上游内引物FIP_C：5’-ATTGATCAGACCCACACCACGAACATAGTTTTTCAGCTCG-3’(SEQ ID NO：11)；

下游内引物BIP_C：5’-TAGGTGAACCACATCATACCTAGTGCGACTGTATATTCTTTCCA-3’(SEQ IDNO：12)；

引物组D：

上游外引物F3_D：5’-TGGAAAGAATATACAGTCGC-3’(SEQ ID NO：13)；

下游外引物B3_D：5’-CTGCTCTCGGTAATTGTG-3’(SEQ ID NO：14)；

上游内引物FIP_D：5’-GGCAAATCGATTGAATTTTGCCGGTTAGATTCATAGAGACTTCC-3’(SEQ IDNO：15)；

下游内引物BIP_D：5’-GCAGATTAACCGACTTAGTAGGATGTTAATACGCTCGCGATA-3’(SEQ IDNO：16)；

引物组D’：

上游外引物F3_D：5’-TGGAAAGAATATACAGTCGC-3’；

下游外引物B3_D：5’-CTGCTCTCGGTAATTGTG-3’；

上游内引物FIP_D：5’-GGCAAATCGATTGAATTTTGCCGGTTAGATTCATAGAGACTTCC-3’；

下游内引物BIP_D：5’-GCAGATTAACCGACTTAGTAGGATGTTAATACGCTCGCGATA-3’；

下游环引物LB_D：5’-AGAAGTACTGGAAATGCACGAT-3’(SEQ ID NO：19)。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述酶反应体系包括：1×BstDNA聚合酶反应缓冲液，2-9mmol/LMg²⁺，1.0-1.6mmol/L dNTP，0.8-2.0μmol/L的FIP和BIP引物，0.15-0.3μmol/L的F3和B3引物，0.16-0.64U/μLBstDNA聚合酶，0-1.5mol/L的甜菜碱，包括或不包括0.4-1.0μmol/L的LF或LB引物。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述恒温扩增反应的反应程序为：①60～65℃孵育10～90min；②80℃终止反应2～20min。