[发明专利]一种检测组织蛋白酶B的生物传感器及其检测方法和应用

权利要求书

1.一种检测组织蛋白酶B的生物传感器，其特征在于，所述生物传感器至少多肽-DNA偶联物，DNA模板1和DNA模板2；

其中，

所述多肽-DNA偶联物含有组织蛋白酶B的生物素化肽底物，其中肽底物C端修饰有生物素，肽底物N端与DNA 5'端连接；多肽-DNA偶联物的DNA部分作为核酸扩增反应的引物；

所述DNA模板1包含三个主要区域X*-Y*-Z*；

所述DNA模板2包含三个主要区域Z*-Y*-X*；

所述X*序列为5'-AAC AGA CTC ACT ACG ACC GGG AC-3'(SEQ ID No.1)；

所述Y*序列为5'-AAC AGA CTC CAC AAA TTC GAC C-3'(SEQ ID No.2)；

所述Z*序列为5'-CGT GAA TAA CTC TAC TAT C-3'(SEQ ID No.3)；

所述DNA模板1核苷酸序列为：5'-CGT GAA TAA CTC TAC TAT CAACAGACTCC ACA AATTCG ACC AACAGACTC ACT ACG ACC GGG AC-磷酸基团-3'(SEQ ID No.4)；其中，下划线区域表示Nt.BstNBI的识别位点；

所述DNA模板2核苷酸序列为：5'-AAC AGA CTC ACT ACG ACC GGG ACA ACA GACTCCACA AAT TCG ACC AACAGA CTC CGT GAA TAA CTC TAC TAT C-磷酸基团-3'(SEQ IDNo.5)；其中，下划线区域表示Nt.BstNBI的识别位点；

所述多肽-DNA偶联物中DNA的序列为5'-GTC CCG GTC GTA GTG AGT CT-3'(SEQ IDNo.7)；

所述多肽-DNA偶联物的序列为：C_term-生物素-KGFRLC-N_term-GTC CCG GTC GTA GTG AGTCT。

2.如权利要求1所述的生物传感器，其特征在于，两个DNA模板中，Y*区域的左右两侧设置有限制性核酸内切酶的识别位点。

3.如权利要求1所述的生物传感器，其特征在于，所述含有组织蛋白酶B的生物素化肽底物具体为生物素修饰的KGFRLC(SEQ ID No.6)。

4.如权利要求1所述的生物传感器，其特征在于，所述检测组织蛋白酶B的生物传感器还包括信号探针，所述信号探针为一RNA寡核苷酸，在所述RNA寡核苷酸两端分别使用荧光剂和淬灭剂进行修饰。

5.如权利要求4所述的生物传感器，其特征在于，所述荧光剂选自FAM，所述淬灭剂选自BHQ1。

6.如权利要求4所述的生物传感器，其特征在于，所述信号探针的序列为：5'-FAM-rArUrArArCrUrCrUrArCrUrArUrC-BHQ1-3'。

7.如权利要求1所述的生物传感器，其特征在于，所述检测组织蛋白酶B的生物传感器还包括磁珠、DNA聚合酶和核糖核酸酶H。

8.如权利要求7所述的生物传感器，其特征在于，所述磁珠为链霉亲和素修饰的磁珠。