[发明专利]一种检测氟虫腈及其代谢物的胶体金试纸条及其制备方法有效

专利信息
申请号: 202010042620.7 申请日: 2020-01-15
公开(公告)号: CN111187346B 公开(公告)日: 2023-05-05
发明(设计)人: 周兴华;张彩芹;张勋;张涛;肖香;王云 申请(专利权)人: 江苏大学
主分类号: C07K14/765 分类号: C07K14/765;C07K16/44;G01N33/577;G01N33/531;C07D231/44
代理公司: 暂无信息 代理人: 暂无信息
地址: 212013 江*** 国省代码: 江苏;32
权利要求书: 查看更多 说明书: 查看更多
摘要:
搜索关键词: 一种 检测 氟虫腈 及其 代谢物 胶体 试纸 制备 方法
【权利要求书】:

1.一种检测氟虫腈及其代谢物的胶体金试纸条制备方法,其特征在于,包括以下步骤:

半抗原的制备:将氟虫腈通过酸水解法并加入乙酸,引入羧基,制备得到半抗原,所述半抗原的制备具体为:

将氟虫腈溶于浓硫酸、乙酸和水中,加热回流,然后滴加氢氧化钠水溶液,直到pH达到碱性,加纯水溶解沉淀物,用正己烷洗涤水溶液,分液酸化水层溶液,直到pH到酸性,然后用乙酸乙酯萃取,合并有机相,用饱和的盐水洗涤,经无水硫酸钠干燥,减压蒸发,过硅胶柱,得到白色固体,即为半抗原;所述浓硫酸的质量分数为98%;所述氟虫腈、浓硫酸、乙酸、水用量比为300~500mg:1~4mL:1~3mL:1~2mL;所述纯水和沉淀物的用量比为2~3 mL:200~600mg;

免疫原和包被原的制备:将所述半抗原通过活化酯法偶联蛋白质分别制备免疫原和包被原,所述免疫原和包被原的制备具体为:

半抗原的活化:将所述半抗原溶于二甲基甲酰胺DMF中,向其中加入N-羟基琥珀酰亚胺NHS和1-乙基碳二亚胺盐酸盐EDC,并将混合物搅拌活化,得到已活化的半抗原;所述半抗原、DMF、NHS和EDC的用量比为2~4mg:0.5~1mL:1~4 mg:2~7 mg;所述搅拌活化时间为6~8h;

免疫原的制备:将牛血清白蛋白BSA充分地溶解在碳酸盐缓冲液CBS中,得到BSA溶液,在磁力搅拌下将已活化的半抗原溶液逐滴地加到BSA溶液中,将混合物搅拌反应,得到免疫原,免疫原用磷酸盐缓冲PBS透析;

包被原的制备:将鸡卵清白蛋白OVA充分地溶解在碳酸盐缓冲液CBS中,得到OVA质溶液,在磁力搅拌下将已活化的半抗原溶液逐滴地加到OVA溶液中,将混合物搅拌反应,得到包被原,包被原用磷酸盐缓冲PBS透析;

单克隆抗体的制备:用所述免疫原制备单克隆抗体,用所述包被原通过ic-ELISA检测单

克隆抗体的灵敏度和特异性,得到抗氟虫腈及其代谢物的单克隆抗体;

金标抗体的制备:将所述单克隆抗体用胶体金标记制备得到金标抗体;

胶体金试纸条的制备:用氟虫腈偶联蛋白质的包被原在硝酸纤维素膜上制作检测线,以二抗在硝酸纤维素膜上制作质控线,然后组装成试纸条。

2.根据权利要求1所述的检测氟虫腈及其代谢物的胶体金试纸条制备方法,其特征在于,所述免疫原的制备过程中,所述BSA和CBS缓冲液的用量比为7~15mg:3~5 mL;

所述包被原的制备过程中,所述OVA和CBS缓冲液的用量比为5~10mg:2~5 mL;

所述已活化的半抗原溶液中的半抗原与BSA溶液中的蛋白质的摩尔比,以及已活化的半抗原溶液中的半抗原与OVA溶液中的蛋白质的摩尔比均为20:1~40:1;

所述搅拌反应的温度为4℃,搅拌反应的时间为12~18 h;

所述PBS缓冲液透析时的温度为4℃,时间为36~78 h。

3.根据权利要求1所述的检测氟虫腈及其代谢物的胶体金试纸条制备方法,其特征在于,所述金标抗体的制备具体为:

取纯水加热沸腾,在搅拌条件下加入氯金酸溶液,再加入柠檬酸三钠溶液,得到胶体金溶液;

取胶体金溶液,加入硼酸缓冲液,充分混匀之后逐滴加入所述单克隆抗体溶液反应,然后逐滴加入10% BSA封闭,得到混合溶液;

将所述混合溶液离心,弃去上清液,得到沉淀物,将所述沉淀物溶于重悬液中,得到金标抗体。

4.根据权利要求3所述的检测氟虫腈及其代谢物的胶体金试纸条制备方法,其特征在于,所述纯水、氯金酸溶液与柠檬酸三钠溶液的用量比500~900 mL:1~2mL:1~3 mL;

所述胶体金溶液、单克隆抗体溶液、硼酸缓冲液和10%BSA用量比是3~6mL:18~48μg:300~600μL:200~800μL;

所述沉淀物和重悬液的用量比为0.1~1mg:300~500μL。

下载完整专利技术内容需要扣除积分,VIP会员可以免费下载。

该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息,商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于江苏大学,未经江苏大学许可,擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作,请联系【客服

本文链接:http://www.vipzhuanli.com/pat/books/202010042620.7/1.html,转载请声明来源钻瓜专利网。

×

专利文献下载

说明:

1、专利原文基于中国国家知识产权局专利说明书;

2、支持发明专利 、实用新型专利、外观设计专利(升级中);

3、专利数据每周两次同步更新,支持Adobe PDF格式;

4、内容包括专利技术的结构示意图流程工艺图技术构造图

5、已全新升级为极速版,下载速度显著提升!欢迎使用!

请您登陆后,进行下载,点击【登陆】 【注册】

关于我们 寻求报道 投稿须知 广告合作 版权声明 网站地图 友情链接 企业标识 联系我们

钻瓜专利网在线咨询

周一至周五 9:00-18:00

咨询在线客服咨询在线客服
tel code back_top