[发明专利]一种检测氟虫腈及其代谢物的胶体金试纸条及其制备方法

说明书

本发明提供一种检测氟虫腈及其代谢物的胶体金试纸条及其制备方法，包括以下步骤：半抗原制备、免疫原和包被原制备、单克隆抗体的制备、金标抗体的制备、胶体金试纸条的制备；本发明用氟虫腈偶联蛋白质的包被原在硝酸纤维素膜上制作检测线，以二抗在硝酸纤维素膜上制作质控线，将样本提取液与金标抗体孵育，插入试纸条进行检测。本发明通过制备高灵敏度和高特异性的抗氟虫腈及其代谢物的单克隆抗体，而后在基于单克隆抗体之上建立速度快、成本低、灵敏度高且能同时检测氟虫腈及其代谢物的胶体金试纸条，本发明试纸条既能同时检测氟虫腈及其代谢物又无需仪器辅助，成本低、操作简单、适宜现场样本的快速筛选。

技术领域

本发明属于食品安全检测技术领域，具体涉及一种同时快速检测氟虫腈及其代谢物的胶体金试纸条及其制备方法。

背景技术

氟虫腈，英文名称是芬普尼(fipronil)，化学名称是(RS)-5-氨基-1-(2，6-二氯-4-三氟甲苯基)-4-三氟甲基亚磺酰基砒唑-3-腈，是在20世纪八十年代开发出的一种苯基吡唑类杀虫剂，是有机磷农药的替代物之一，由于其杀菌效果好且广谱性高，广泛应用在水果、蔬菜等农作物的害虫防治、家庭和娱乐场所的寄生虫和害虫的防控。氟虫腈是通过破坏害虫的γ- 氨基丁酸(GABA)控制的氯离子通道，从而破坏其正常的神经中枢系统来控制害虫。相关研究表明氟虫腈具有慢性的神经毒性，已经被定为C类的致癌物质，氟虫腈可影响人体健康并导致结膜炎，头晕，癫痫发作，躁动，出汗等症状。氟虫腈在自然环境中通过光解，氧化，还原作用降解为更加具有毒性的氟甲腈、氟虫腈砜和氟虫腈亚砜代谢产物。氟甲腈的大鼠的 LD₅₀仅仅是其母体本身的1/6，其对大鼠的毒性远远大于其本身。氟虫腈砜对溞类的毒性约是为其母体本身的6倍，氟虫腈亚砜的生物累积性是氟虫腈母体的5倍。我国在2009年发布的1157号公告中规定了氟虫腈只限制于玉米等部分种子包衣中使用，在国标食品中农药残留限量(GB-2763-2016)中规定了氟虫腈及其代谢物在谷物、油料和油脂、蔬菜、水果、糖料和食用菌的残留限量范围是0.02～0.1mg/kg。

目前，氟虫腈的检测方法主要是仪器分析法，主要包括气相色谱-串联质谱联用(GC-MS)，液相色谱-串联质谱联用(LC-MS/MS)，高效液相色谱(HPLC)，高效液相二极管阵列检测法(HPLC-DAD)，这些方法虽然灵敏度和准确度高，但是需要昂贵的仪器、专业操作人员、前处理复杂且耗时，因此，不适宜现场大量样本的快速筛选。免疫分析方法是基于抗原抗体的特异性反应的一种的检测方式。目前国内已授权或公告的关于氟虫腈的免疫分析检测法主要有：公开号为CN201710990416.6的一种检测氟虫腈的试剂盒及其制备方法和应用、公开号为CN201711059643.3的一种检测茶叶中氟虫腈的化学发光免疫检测试剂盒，以上两种发明均是ELISA试剂盒的发明应用，检测过程需反复洗板且耗时长，结果因操作人员不同会有一定的差异性，结果需仪器进行读数，不适宜现场大量样本的快速筛选；公开号为CN201810005898.X的一种快速检测微量氟虫睛的表面增强拉曼金标试纸条及其制备方法，该发明的检测方法拉曼信号不稳定易出现假阳现象，检测结果需借助拉曼仪器的辅助，拉曼仪器昂贵，检测成本高；公开号为2018103135712.0的一种利用光照和表面增强拉曼快速检测氟虫腈的方法，该发明的方法是通过检测氟虫腈的主要光解产物氟甲腈来间接的检测氟虫腈的存在，增加了检测步骤和时间，结果准确度不高，拉曼仪器昂贵，成本升高；公开号为 201810005478.1的一种快速检测微量氟虫腈的胶体金标试纸条及其制备方法，该发明的检测方法只针对氟虫腈本身，对更加具有毒性的氟虫腈代谢物的检测并没有涉及。氟虫腈在自然环境中极易被降解，该方法的准确度不高。

发明内容

针对上述问题，本发明提供一种同时快速检测氟虫腈及其代谢物的胶体金试纸条及其制备方法，通过制备高灵敏度和高特异性的抗氟虫腈及其代谢物的单克隆抗体，而后在基于抗体之上建立速度快、成本低、灵敏度高且能同时检测氟虫腈及其代谢物胶体金试纸条，所述试纸条既能同时检测氟虫腈及其代谢物又无需仪器辅助，成本低、操作简单、适宜现场样本的快速筛选。

一种检测氟虫腈及其代谢物的胶体金试纸条制备方法，包括以下步骤：