[发明专利]纳米级人工抗原呈递细胞αCD3-Origami aAPC及其制备方法和应用有效
申请号: | 202010042888.0 | 申请日: | 2020-01-15 |
公开(公告)号: | CN111172146B | 公开(公告)日: | 2023-09-12 |
发明(设计)人: | 裴昊;孙越洋;李丽 | 申请(专利权)人: | 苏州朴衡科技有限公司 |
主分类号: | C12N11/10 | 分类号: | C12N11/10;C12N5/078;A61K35/15;A61P35/00 |
代理公司: | 上海麦其知识产权代理事务所(普通合伙) 31257 | 代理人: | 董红曼 |
地址: | 215533 江苏省苏州市*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 纳米 人工 抗原 呈递 细胞 cd3 origami aapc 及其 制备 方法 应用 | ||
1.基于核酸框架结构的纳米级人工抗原呈递细胞αCD3-Origami aAPC的制备方法,其特征在于,该方法的步骤包括以下:
(1)在缓冲体系中,将M13mp18单链噬菌体DNA、组成核酸框架结构单链DNA、生物素修饰的短的单链DNA混合,进行梯度降温,得到生物素化的核酸框架结构;所述M13mp18单链噬菌体DNA、组成核酸框架结构单链DNA、生物素修饰的短的单链DNA的摩尔浓度比是1:(5-10):(5-10);
(2)待步骤(1)的生物素化的核酸框架结构超滤纯化后,加入链霉亲和素和生物素化的抗-CD3蛋白进行反应,得到所述基于核酸框架结构的纳米级人工抗原呈递细胞αCD3-Origami APC;所述核酸框架结构与链霉亲和素的摩尔浓度比为1:(5~10);所述核酸框架结构对应链霉亲和素和生物素化的αCD3蛋白分子的摩尔浓度比是1:(5~10)。
2.如权利要求1所述的制备方法,其特征在于,生物素修饰的短的单链DNA在αCD3-Origami APC上的间距为10~100 nm。
3.如权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述步骤(1)中,所述缓冲体系为1xTAE-Mg2+,其中镁离子浓度为12.5 mmol/L。
4.如权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述步骤(1)中,所述梯度降温为从95℃降至25℃,每秒降低0.1 ℃。
5.如权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述步骤(2)中,所述超滤纯化采用的超滤管为100 KD,超滤离心的转速为10000 g,2 min,倒扣回收时的转速为2000 g,2 min。
6.如权利要求1所述制备方法得到的基于核酸框架结构的纳米级人工抗原呈递细胞αCD3-Origami aAPC。
7.一种如权利要求6所述的基于核酸框架结构的纳米级人工抗原呈递细胞αCD3-Origami aAPC,其特征在于,所述αCD3-Origami aAPC所修饰的αCD3蛋白分子的个数及间距可控,由设计核酸结构时选取的生物素化的单链DNA条数及位置所决定。
8.如权利要求6或7所述的基于核酸框架结构的纳米级人工抗原呈递细胞αCD3-Origami aAPC在制备用于T细胞激活、增殖的药剂中的应用。
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